能量代謝障礙新生豬RTE細胞損傷機制的研究.pdf

1、四川大學博士學位論文能量代謝障礙新生豬RTE細胞損傷機制的研究姓名：陳娟申請學位級別：博士專業(yè)：兒科學指導教師：姚裕家20030415麓量代! ! 竺竺竺蘭蘭三蘭竺竺苧! 苧竺竺! 苧—— ——————_ ——————————————————————_ ————，———————————一。一能量代謝障礙新生豬R T E 細胞損傷機制的研究博士研究生 陳娟導 師 姚裕家教授指導小組 李煒如教授熊英副教授摘要目的：為探討窒息新生兒腎小管上皮

2、( R T E ) 細胞缺氧損傷的機制，在建立A T P缺乏新生豬R T E 細胞缺氧模型基礎(chǔ)上，研究R T E 細胞O l 整合素細胞一細胞間分布及數(shù)量變化，R h o 對F ．a(chǎn) c t i n 的調(diào)控以及磷酸肌酸( c P ) 對新生豬R T E 細胞缺氧損傷的保護作用。方法：( 1 ) 采用機械碾磨加酶消化法進行新生豬R T E 細胞體外原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，應用形態(tài)學( 光鏡) ，P a n C K 和C K - 1 8 免疫細

3、胞化學進行R T E細胞的鑒定；( 2 ) 應用A n t i m y c i nA 建立新生豬R T E 細胞化學缺氧模型，并以反高效液相色譜檢測各缺氧時段組( 1 m i n 、1 0 r a i n 、3 0 r a i n 、6 0 r a i n )中A T P 含量；( 3 ) 應用免疫細胞化學方法及流式細胞技術(shù)觀察分析缺氧不同時段( 1 m i n 、1 0 r a i n 、3 0 m i n 、6 0 r a i n

4、) 新生豬pl 整合素分布的改變和數(shù)量的變化；( 4 ) 應用R h o 蛋白S D S 多聚烯凝膠電泳和免疫熒光技術(shù)，研究缺氧不同時段( 1 m i n 、1 0 r a i n 、3 0 r n J n 、6 0 r a i n ) 新生豬R h o 的表達及其對細胞骨架蛋白F - a c t i n 的影響；( 5 ) 應用反高效液相色譜法結(jié)合流式細胞技術(shù)，檢測新生豬R T E 細胞缺氧不同時段0 r a i n 、1 0 r a