腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1-CD82與宮頸癌相關(guān)性研究.pdf

1、本研究擬通過(guò)檢測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1/CD82在宮頸癌組織中的蛋白表達(dá)狀況，以及觀察它對(duì)宮頸癌Caski細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響，對(duì)該基因與宮頸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性作一初步探討，通過(guò)檢測(cè)人乳頭瘤病毒HPV16E6、E7，HPV18在宮頸癌組織中的感染情況，探討HPV是否影響KAI1/CD82基因的表達(dá)。 方法：采用免疫組化LsAB法對(duì)70例浸潤(rùn)性宮頸癌，15例原位癌，20例正常宮頸組織以及29例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的石蠟標(biāo)本進(jìn)行KAI1

2、/CD82蛋白表達(dá)檢測(cè)，分析KAI1/CD82與宮頸癌臨床分期、病理分級(jí)、病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸間質(zhì)肌層浸潤(rùn)深度等病理特點(diǎn)的關(guān)系；采用PCR擴(kuò)增-瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)浸潤(rùn)性宮頸癌以及原位癌組織中人乳頭瘤病毒HPV16E6、E7，HPV18的DNA狀況；分析HPV16E6、E7，HPV18感染與KAI1/CD82蛋白表達(dá)的相關(guān)性；通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將真核表達(dá)質(zhì)粒PCMV-KAI1cDNA導(dǎo)入低表達(dá)的宮頸癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系Caski，通

3、過(guò)MTT法測(cè)生長(zhǎng)曲線以及粘附實(shí)驗(yàn)、侵襲力小室觀察細(xì)胞體外生長(zhǎng)、體外侵襲能力以及對(duì)人工細(xì)胞外基質(zhì)的粘附情況。 結(jié)果：1.KAI1/CD82在宮頸浸潤(rùn)癌組織及原位癌中的蛋白表達(dá)與正常宮頸上皮中的表達(dá)相比明顯下調(diào)(P＜0.05)，主要位于上皮細(xì)胞的胞膜，在癌細(xì)胞中還表達(dá)于胞漿，在癌組織中以不均勻性灶性分布為主，原位癌與浸潤(rùn)癌中的表達(dá)差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 2.KAI1/CD82的蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床分期、病理類(lèi)型、淋巴

4、結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)以及宮頸間質(zhì)肌層浸潤(rùn)深度均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)；KAI1/CD82在高中分化組中的蛋白表達(dá)高于低分化組(P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)有強(qiáng)有弱，與其原發(fā)灶中的表達(dá)相比無(wú)差異(P＞0.05)。 3.HPV16E6、E7，HPV18在浸潤(rùn)性宮頸癌和原位癌中的陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異(P＜0.05)，與臨床分期、病理分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)以及宮頸間質(zhì)肌層浸潤(rùn)深度均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)，HPV16E6感染主要

5、與鱗癌關(guān)系密切(P=0.009)，陽(yáng)性率為75.5％，HPV18在腺癌中的陽(yáng)性率高于鱗癌。 4.HPV16E6、E7，HPV18感染與KAI1在宮頸癌中的蛋白表達(dá)下調(diào)無(wú)直接相關(guān)性(P＞0.05)，即HPV16E6、E7，HPV18可能并不是導(dǎo)致KAI1在宮頸癌中蛋白表達(dá)下調(diào)的重要因素。 5.通過(guò)脂質(zhì)體成功轉(zhuǎn)染PCMV-KAI1于宮頸癌Caski細(xì)胞后，細(xì)胞免疫組化證實(shí)轉(zhuǎn)染目的基因的Caski-Kai1細(xì)胞中KAI1/CD

6、82蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。 6.轉(zhuǎn)染KAI1cDNA的宮頸癌Caski細(xì)胞的體外增殖能力明顯弱于轉(zhuǎn)染空載體組與未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05)，而后二者之間無(wú)差異(P＞0.05)。7.體外粘附實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染KAI1cDNA的Caski-Kai1細(xì)胞對(duì)人工細(xì)胞外基質(zhì)的異質(zhì)性粘附能力強(qiáng)于Caski和轉(zhuǎn)染空載體的Caski-vector細(xì)胞(P＜O.05)，Caski和Caski-vector細(xì)胞的粘附能力無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05

7、)。 8.Transwell侵襲力小室試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Caski-Kai1組細(xì)胞穿膜數(shù)量明顯少于Caski和Caski-vector組，差異有顯著性(P＜0.05)，而Caski和Caski-vector組無(wú)明顯差異，說(shuō)明KAI1/CD82對(duì)細(xì)胞體外侵襲能力有抑制作用。 2結(jié)論：腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1/CD82對(duì)宮頸癌細(xì)胞體外增殖運(yùn)動(dòng)侵襲能力有一定影響，但對(duì)宮頸癌組織的惡性侵襲行為可能不是一個(gè)主要影響因素，通過(guò)擴(kuò)大樣本含量以及