砂地柏內(nèi)生真菌初步研究.pdf

1、砂地柏SabinavulgarisAnt為柏科Cupressaceae圓柏屬Sabina常綠葡匐灌木，是一種重要的藥用和殺蟲植物。內(nèi)生真菌作為一類特殊的微生物類群，能夠產(chǎn)生許多結(jié)構(gòu)新穎、生理活性獨(dú)特的和與宿主植物相同或相似的天然生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)，因而在天然藥物領(lǐng)域具有巨大的研究開發(fā)潛力。正基于此，本研究對(duì)砂地柏內(nèi)生真菌進(jìn)行了初步研究。 主要結(jié)果如下： (1)采用常規(guī)分離方法，在4種培養(yǎng)基上，對(duì)砂地柏不同年份莖、葉和果實(shí)

2、，根和莖的木質(zhì)部和韌皮部等組織的內(nèi)生真菌進(jìn)行了分離純化，從中分離得到126株內(nèi)生真菌。結(jié)果顯示砂地柏內(nèi)生真菌菌株分布量隨樹齡的增長而增加；在莖和葉組織中菌株分布多于其它組織。PDA和CA培養(yǎng)基比其他培養(yǎng)基更利于砂地柏內(nèi)生真菌的分離培養(yǎng)。 (2)采用小葉碟添加法和浸毒葉片法，篩選了分離得到的內(nèi)生真菌的殺蟲活性。結(jié)果表明，在菌株代謝產(chǎn)物濃度為20mg/mL的劑量下，有28株內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)三齡初期粘蟲表現(xiàn)出拒食或毒殺活性，其中14

3、株拒食率或死亡率大于50％；有24株內(nèi)生真菌對(duì)三齡初期小菜蛾表現(xiàn)出拒食或毒殺活性，其中7株拒食率或死亡率大于50％。 (3)以砂地柏代表性此生代謝產(chǎn)物苦鬼臼毒素、鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素為外標(biāo)物，對(duì)菌株發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行HPLC檢測(cè)分析，結(jié)果顯示，從6株菌株的代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)可能含有鬼臼類物質(zhì)或與鬼臼類物質(zhì)具有相似UV特征的化合物。 (4)殺蟲活性篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株LP1-3對(duì)三齡初期小菜蛾表現(xiàn)出現(xiàn)對(duì)較高的毒殺活性；同時(shí)HPLC檢測(cè)

4、分析的結(jié)果顯示菌株LP1-3代謝產(chǎn)物中可能含有鬼臼類物質(zhì)或與鬼臼類物質(zhì)具有相似UV特征的化合物；而且菌株LP1-3的發(fā)酵產(chǎn)量相對(duì)較高，約232.5mg/L。因此確定對(duì)菌株LP1-3進(jìn)行進(jìn)一步研究。 (5)對(duì)菌株LP1-3的代謝產(chǎn)物進(jìn)行初步分離純化，得到一個(gè)純品化合物。通過對(duì)該化合物質(zhì)譜、紅外光譜、紫外光譜、核磁共振譜的初步分析，推測(cè)該化合物可能為一種木脂素類化合物。采用小葉碟添加法測(cè)定了該化合物對(duì)三齡初期粘蟲的拒食活性，其48h