富鉻釀酒酵母的單倍體原生質(zhì)體復(fù)合誘變育種及其生物學(xué)功能研究.pdf

1、鉻是人體必需的微量營(yíng)養(yǎng)元素之一，是人體內(nèi)葡萄糖耐量因子(glucosetolerancefactor，GTF)的重要組成成分。人體缺鉻會(huì)產(chǎn)生葡萄糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝障礙，引起各種疾病，如動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、冠心病、末梢神經(jīng)炎、近視眼等；動(dòng)物缺鉻則表現(xiàn)為膽固醇或血糖升高、生長(zhǎng)遲緩、免疫力下降、繁殖能力下降和壽命縮短等，補(bǔ)鉻后，癥狀消失(AndersonRA，1997)。由于不同形式的鉻在組織中的結(jié)合程度不同，導(dǎo)致吸收率不同。無(wú)機(jī)鉻不但毒

2、性大，且吸收水平極低，約為0.14％-3.0％；有機(jī)鉻吸收迅速且安全，吸收率可達(dá)10％-25％. 在有機(jī)鉻制劑中，富鉻酵母具有生物活性高、毒性小、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，尤其是作為預(yù)防和治療糖尿病藥物的重要功效成分已引起人們極大重視。同時(shí)，酵母本身的生物活性物質(zhì)對(duì)生物體也有保健作用。普通釀酒酵母富集鉻的能力非常有限，本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)原生質(zhì)體復(fù)合誘變選育富鉻能力遠(yuǎn)高于普通釀酒酵母的新型誘變菌株，以應(yīng)用于生產(chǎn)。 以釀酒酵母(Sacc

3、haromycescerevisiae)SY8二倍體為出發(fā)菌株，通過(guò)單倍體分離，液體抗性水平檢測(cè)，獲得了釀酒酵母單倍體抗性菌株SY8-6(Cr3+抗性5mmol/L)。以蝸牛酶酶解SY8-6菌株制備其原生質(zhì)體，原生質(zhì)體形成優(yōu)化條件為：0.8mol/LNaCl，1.5％蝸牛酶，酶解45min，0.3％β-巰基乙醇。 對(duì)SY8-6菌株的原生質(zhì)體進(jìn)行紫外線(xiàn)誘變，紫外燈功率為30W，工作距離30cm，最佳照射時(shí)間為50s。通過(guò)液體抗性水

4、平檢測(cè)獲得了1株誘變菌株SY8-6-4(Cr3+抗性10mmol/L)，其拮抗CrCl3濃度為出發(fā)菌株的2倍。 將SY8-6-4菌株再次進(jìn)行原生質(zhì)體微波復(fù)合誘變，微波源為2450MHz，功率為850W，最佳照射時(shí)間為80s。通過(guò)液體抗性水平檢測(cè)獲得了1株復(fù)合誘變菌株SY8-6-4-29(Cr3+抗性20mmol/L)，其拮抗CrCl3濃度是出發(fā)菌株的4倍。在非重金屬選擇壓力下，50世代的遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)表明，誘變菌株SY8-6-4