瘦素對(duì)載脂蛋白M表達(dá)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分瘦素在正常大鼠體內(nèi)對(duì)載脂蛋白M表達(dá)和分泌的影響
　　目的：構(gòu)建大鼠尾靜脈注射模型，研究瘦素（leptin）在正常大鼠體內(nèi)對(duì)載脂蛋白M（apoM）表達(dá)及分泌的影響。
　　方法：健康成年SD雄性大鼠，采取尾靜脈注射方式分別泵入生理鹽水和50ng/ml leptin，泵速設(shè)為2.5ml/h，持續(xù)6hrs。分別檢測(cè)大鼠血糖、胰島素、總膽固醇（TC）、總甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（L

2、DL-C）水平。RT-PCR方法檢測(cè)大鼠肝臟apoM、apoB、LDL-R及apoAI表達(dá)的變化，dot-blotting方法血清ApoM的變化。
　　結(jié)果：尾靜脈置管連續(xù)輸入50ng/ml leptin6hrs后，SD大鼠肝臟apoM mRNA水平下降55.15%（P=0.0159），apoB和LDL mRNA水平分別下降48.60%（P=0.0079）及40.43%（P=0.0159），apoAI表達(dá)增加149%（P=0.00

3、79），而血清apoM水平則無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。尾靜脈模型中，50ng/ml leptin對(duì)處理組大鼠血清胰島素水平較對(duì)照組下降68.82%（P=0.0317），而血糖增加14.68%（P=0.0079），其他脂蛋白無明顯變化。
　　結(jié)論：leptin對(duì)apoM的表達(dá)調(diào)節(jié)可能首先發(fā)生在肝臟，肝臟是leptin調(diào)節(jié)apoM表達(dá)的關(guān)鍵部位。leptin在體內(nèi)對(duì)apoM的表達(dá)調(diào)節(jié)可能與低胰島素水平和高血糖水平相關(guān)。
　　第二部分瘦素

4、在離體肝灌注系統(tǒng)及肝細(xì)胞中對(duì)載脂蛋白M表達(dá)的影響
　　目的：利用大鼠離體肝灌注模型及人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞，進(jìn)一步研究leptin在肝臟中對(duì)apoM及相關(guān)脂質(zhì)的表達(dá)調(diào)節(jié)作用。
　　方法：健康成年SD雄性大鼠肝臟游離后，將肝臟置于灌注裝置中。
　　（1）leptin對(duì)離體肝臟apoM表達(dá)的影響：持續(xù)以5ml/min分別泵入培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）、含10ng/ml leptin培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）

5、、含100ng/ml leptin培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L），分別設(shè)立對(duì)照組，每組8個(gè)離體肝灌注模型。持續(xù)6hrs后取肝組織標(biāo)本檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的mRNA水平。
　?。?）人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞經(jīng)不同濃度leptin（10ng/ml、100ng/ml、500ng/ml）分別孵育24hrs后，檢測(cè)apoM mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：在離體肝灌注模型中，生理濃度leptin（10ng/ml）對(duì)apoM、apoB、LDL

6、R表達(dá)無明顯影響（P>0.05），超濃度leptin處理組（100ng/ml）能顯著上調(diào)apoM、apoB、LDLR的表達(dá)（P值分別為0.029，0.047，0.008），生理濃度leptin（10ng/ml）和超濃度leptin處理組（100ng/ml）對(duì)肝臟apoAI的表達(dá)無明顯影響（P>0.05）。500ng/ml leptin均能顯著下調(diào)人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞apoM mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)論：Leptin對(duì)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞a

7、poM mRNA表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用。離體肝灌注系統(tǒng)缺乏體內(nèi)的整體調(diào)節(jié)機(jī)制，與正常體內(nèi)環(huán)境相比，leptin與胰島素之間的反饋調(diào)節(jié)信號(hào)受阻，這可能是leptin在肝灌注系統(tǒng)中對(duì)apoM的調(diào)節(jié)作用不同于體內(nèi)調(diào)節(jié)的一個(gè)原因。
　　第三部分瘦素調(diào)節(jié)載脂蛋白M表達(dá)的機(jī)制研究
　　目的：研究大鼠離體肝灌注模型及人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞中，leptin調(diào)控apoM表達(dá)的可能機(jī)制。
　　方法：離體肝臟灌注組分為4組（8只/組），分別為：<

8、br>　?、倥囵B(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）+0ng/ml leptin；
　?、谂囵B(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）+0ng/ml leptin+10μM LY294002；
　?、叟囵B(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）+100ng/ml leptin；
　　④培養(yǎng)液（含牛血清白蛋白30g/L）+100ng/ml leptin+10μM LY294002。持續(xù)以5ml/min泵入上述灌注液，持續(xù)6hrs。6hrs后取肝組

9、織標(biāo)本檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的mRNA水平。
　　人正常細(xì)胞株LO2細(xì)胞分別經(jīng)：
　?、賀PMI1640培養(yǎng)液+500ng/ml leptin；
　?、赗PMI1640培養(yǎng)液+500ng/ml leptin+1μM LY294002；
　?、跼PMI1640培養(yǎng)液+500ng/ml leptin+5μM LY294002；
　　④RPMI1640培養(yǎng)液+500ng/ml leptin+10μM LY294002孵育2

10、4hrs后，檢測(cè)apoM mRNA表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：LO2細(xì)胞經(jīng)500ng/ml leptin及不同濃度的PI3K阻斷劑LY294002共孵育24hrs后，對(duì)apoM的表達(dá)水平無明顯改變（P>0.05）。含10μM PI3K阻斷劑LY294002的RPMI1640培養(yǎng)液組灌注6hrs后，與對(duì)照組相比apoM表達(dá)水平明顯上升；超生理濃度的leptin（100ng/ml）與10μM LY294002（0μM LY294002