IL-6對(duì)HepG2細(xì)胞載脂蛋白M表達(dá)的影響.pdf

1、目的:載脂蛋白M(apoM)是由Xu和Dahlbaek于1999年發(fā)現(xiàn)并從乳糜微粒中分離和克隆,分子量為26KD。人類apo M基因定位于第6號(hào)染色體短臂,緊鄰MHC-Ⅲ基因區(qū)。該蛋白屬于疏水性分子結(jié)合蛋白家族(lipocalinfamily)成員,主要存在于人血漿高密度脂蛋白(HDL),少量存在于富甘油三酯脂蛋白(TRL)及低密度脂蛋白(LDL)中。最新的研究表明,載脂蛋白M可能對(duì)2型糖尿病大血管病變有保護(hù)作用,對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化。2型

2、糖尿病合并大血管病變病人IL-6比正常人明顯增高,作為炎癥反應(yīng)的核心細(xì)胞因子,IL-6在2型糖尿病大血管并發(fā)癥中的作用備受關(guān)注,鑒于此,本課題在體外研究IL-6對(duì)人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞(HepG2)apoM表達(dá)的影響,進(jìn)而探索2型糖尿病合并大血管病變與apoM、IL-6相關(guān)的發(fā)病機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞,分別以不同濃度的IL-6(1.25,2.5,5,10,20,40,80ng/ml)干預(yù)細(xì)胞24

3、小時(shí),提取細(xì)胞總RNA,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR、瓊脂糖凝膠電泳、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)mRNA水平的HepG2細(xì)胞載脂蛋白M的表達(dá)量,并同時(shí)檢測(cè)另一種載脂蛋白apoAI的表達(dá),用同樣的干預(yù)方式,檢測(cè)IL-1a對(duì)apoM表達(dá)的影響。用蛋白免疫印跡法(WB)檢測(cè)分泌到培養(yǎng)基中的載脂蛋白M的表達(dá)量。
　　 2.用濃度為2.5ng/ml的IL-6對(duì)HepG2細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間干預(yù)(0h、1h、3h、6h、12h、24h),應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR、瓊

4、脂糖凝膠電泳和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)apoM的表達(dá),考察IL-6干預(yù)時(shí)間不同對(duì)apoM表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.IL-6(1.25,2.5,5,10,20,40,80ng/ml)對(duì)HepG2細(xì)胞apoM的表達(dá)具有抑制作用,與對(duì)照組0ng/ml比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-6濃度從0上升到80ng/ml,apoM的相對(duì)表達(dá)水平逐漸降低,IL-6濃度0ng/ml組,1.25ng/ml組分別與其他各組比較差異均有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且0ng/ml組、1.25ng/ml組、2.5ng/ml組之間呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。但是不同濃度的IL-6(1.25,2.5,5,10,20,40,80ng/ml)對(duì)HepG2細(xì)胞干預(yù),apoA1表達(dá)水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,IL-1a(1.25,2.5,5,10,20,40,80ng/ml)對(duì)apoM表達(dá)的影響亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2.時(shí)間依賴實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,IL-6干預(yù)時(shí)間不同,其對(duì)HepG2細(xì)胞apoM的抑制程度有不

6、同,IL-6干預(yù)HepG2細(xì)胞12h,和IL-6干預(yù)24h對(duì)apoM的抑制作用表現(xiàn)顯著,且后者大于前者。而小于12h的干預(yù),抑制作用不明顯。
　　 結(jié)論:IL-6能夠抑制HepG2細(xì)胞載脂蛋白M的表達(dá),這種抑制呈劑量依賴性,并且具有特異性和飽和性。IL-6抑制apoM的表達(dá),apoM的表達(dá)降低削弱了apoM對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用,成為2型糖尿病患者合并大血管病變的又一發(fā)病機(jī)制。2型糖尿病合并大血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制是非常復(fù)雜的,