豬AMSCs的生物學(xué)特性及ATRA對(duì)其成脂分化的影響研究.pdf

1、脂肪組織不僅是機(jī)體內(nèi)重要的能量貯存庫(kù)和賦形組織，還是保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定及具有分泌激素和細(xì)胞因子的重要部位。脂肪細(xì)胞增殖與分化失常是導(dǎo)致肥胖及□型糖尿病的重要因素。2001年Zuk發(fā)現(xiàn)脂肪組織中存在與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemesenchymalstemcells，BMSCs)相似的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adiposemesenchymalstemcells,AMSCs)以來(lái)，在人、小鼠、大鼠、兔等多個(gè)物種上的研究證明其具有體內(nèi)外分化為多種細(xì)胞

2、表型的能力，而且脂肪組織與骨髓相比，具有易分離，干細(xì)胞含量高等優(yōu)點(diǎn)，因此其有望成為未來(lái)細(xì)胞/基因治療和組織工程的主要種子細(xì)胞之一。豬沉積脂肪能力強(qiáng)，是研究脂肪沉積與發(fā)育較為理想的動(dòng)物模型。近年來(lái)的研究也證明，豬在遺傳上比通常使用的其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如小鼠等更接近人類(lèi)。但是，迄今國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)關(guān)于豬AMSCs分離、培養(yǎng)、分化等方面的系統(tǒng)研究報(bào)道。 本文以生長(zhǎng)發(fā)育正常、健康狀況良好的1-3日齡仔豬為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集頸部及肩胛部皮下脂肪組織，膠

3、原酶消化法獲得脂肪基質(zhì)微管成份(Stromalvascularfraction,SVF)，傳代培養(yǎng)，利用免疫組化、流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定并采用MTT比色和細(xì)胞記數(shù)等方法研究了豬AMSCs的生長(zhǎng)增殖特性；運(yùn)用油紅O染色和RT-PCR法研究了AMSCs的成脂分化能力；在此基礎(chǔ)上，研究了ATRA對(duì)豬AMSCs增殖及成脂分化的影響。主要結(jié)果如下： 1.應(yīng)用膠原酶消化法分離獲得豬SVF成份進(jìn)行傳代培養(yǎng)，其中的AMSCs可形成集落。經(jīng)傳代純化，

4、到21代仍然保持其干細(xì)胞的特性。 2.在體外合適的誘導(dǎo)條件下，可以將豬AMSCs誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞。誘導(dǎo)48h，胞內(nèi)開(kāi)始出現(xiàn)小脂滴，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，分散的單個(gè)小脂滴逐漸融合成大脂滴，油紅O染色呈陽(yáng)性。RT-PCR可檢測(cè)到脂肪特異性基因PPARγ和LPL的表達(dá)隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)。 3.利用MTT比色法分析了全反式維甲酸(All-transretinoicacid,ATRA)對(duì)豬AMSCs增殖的影響。結(jié)果表明

5、，生理濃度及藥理濃度的ATRA對(duì)豬AMSCs增殖均沒(méi)有影響。 4.利用油紅O染色提取法和RT-PCR檢測(cè)ATRA對(duì)豬AMSCs成脂分化的影響。結(jié)果表明，生理濃度及藥理濃度的ATRA均抑制豬AMSCs向脂肪細(xì)胞分化，脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志基因LPL和aP2mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比明顯下降(P＜0.05)。 綜上所述，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、表面標(biāo)記和體外分化能力，證明我們從脂肪組織中獲得的能形成集落并經(jīng)多次傳代純化的細(xì)胞為AMSCs。