整合素β1、TNF-α在成骨細(xì)胞凋亡及NO代謝的作用關(guān)系.pdf

1、目的：腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)是一類炎癥因子，整合素β1是存在于細(xì)胞膜上的-中跨膜信號(hào)分子，一氧化氮(nitric oxide，NO)是一種短效自由基，這三種物質(zhì)在細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮不同的生物作用。我們的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖橇私釺NF-β在成骨細(xì)胞活性、凋亡、整合素β1表達(dá)、NO代謝中的作用以及TNF-α與整合素β1對(duì)成骨細(xì)胞凋亡和NO代謝的影響。
　　 方法：
　　 1.運(yùn)用小鼠

2、顱蓋骨原代培養(yǎng)鑒定和傳代的方法獲得生長(zhǎng)狀態(tài)良好的成骨細(xì)胞。
　　 2.將TNF-α與α-MEM培養(yǎng)基配成混懸液，按0μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L的TNF-α濃度與成骨細(xì)胞共培養(yǎng)，按時(shí)間段分為24h和48h組。
　　 3.按TNF-α濃度梯度和時(shí)間組用酶標(biāo)儀檢測(cè)成骨細(xì)胞活性和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性。
　　 4.按TNF-α濃度梯度和時(shí)間組采用流式細(xì)

3、胞儀檢測(cè)成骨細(xì)胞整合素β1的表達(dá)和凋亡，按格里思法檢測(cè)氧化氮的代謝產(chǎn)物--亞硝酸根離子(NO2-)，代表NO的濃度。
　　 5.使用整合素封閉劑封閉整合素β1，按TNF-α濃度梯度檢測(cè)成骨細(xì)胞凋亡，研究整合素和TNF-α的交互作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.實(shí)驗(yàn)獲得的成骨細(xì)胞在3代時(shí)生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定。成骨細(xì)胞進(jìn)行骨結(jié)節(jié)誘導(dǎo)和染色后，出現(xiàn)鈣化的骨結(jié)節(jié)。細(xì)胞活性較好適宜進(jìn)行藥物實(shí)驗(yàn)。
　　 2.隨著TNF-α濃度

4、的升高和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，成骨細(xì)胞活性和堿性磷酸酶活性減低，凋亡增多。
　　 3.48h，TNF-α的濃度為10μg/L時(shí)NO2-含量達(dá)最大值；培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)NO2-的代謝含量維持在一個(gè)較高的濃度，與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.01)。
　　 4.隨著TNF-α濃度的升高和培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，成骨細(xì)胞整合素β1表達(dá)減少。
　　 5.整合素β1封閉后，共培養(yǎng)的TNF-α濃度的升高，成骨細(xì)胞凋亡較未封閉組增多；NO2-的濃

5、度較未封閉組無(wú)明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 1.TNF-α可以降低成骨細(xì)胞活性和堿性磷酸酶活性，且具有一定的時(shí)間和濃度依賴性。
　　 2.單一的TNF-α可以促進(jìn)成骨細(xì)胞NO的代謝和釋放，48h，TNF-α的濃度為10μg/L時(shí)，呈峰值表達(dá)；TNF-α可以誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡。整合素β1對(duì)成骨細(xì)胞NO代謝無(wú)明顯相關(guān)性。
　　 3.成骨細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中，整合素β1的表達(dá)呈陽(yáng)性。高濃度TNF-α能夠抑制成骨細(xì)胞