抗壞血酸對大鼠成骨細胞膜片BMP-2、整合素β1mRNA表達的影響.pdf

1、目的：本研究以不同濃度的抗壞血酸體外構建成骨細胞膜片，觀測抗壞血酸對成骨細胞膜片物理性狀的影響，檢測在不同時間階段成骨細胞膜片BMP-2、整合素β1mRNA表達量的情況，分析抗壞血酸對大鼠成骨細胞膜片成骨效應的影響，為無支架細胞膜片骨組織工程應用于口腔骨缺損的臨床治療提供一定的實驗基礎。
　　方法:選取新生SD大鼠乳鼠，取其顱蓋骨，采用二次酶消化法原代培養(yǎng)大鼠成骨細胞，以差速貼壁法培養(yǎng)純化成骨細胞。通過形態(tài)學觀察、蘇木精-伊紅染色

2、進行成骨細胞觀察，通過堿性磷酸酶和茜素紅染色進行成骨細胞鑒定。采用機械刮取法，以不同濃度抗壞血酸體外構建成骨細胞膜片，實驗組分為A組、B組、C組（完全培養(yǎng)基中分別加入15㎎/L、50㎎/L、85㎎/L的抗壞血酸），對照組為D組（完全培養(yǎng)基中不加抗壞血酸），各組成骨細胞以2×106cells/ml接種于6孔培養(yǎng)板，均高密度連續(xù)培養(yǎng)，分別于第一周和第二周通過鑷子輕提、管狀成形和可縫合性檢測等方法進行成骨細胞膜片的機械性能觀測；并于第一周和第

3、二周，采用實時熒光定量PCR檢測成骨細胞膜片中BMP-2、整合素β1mRNA的表達情況。
　　結果：所培養(yǎng)的細胞經(jīng)過蘇木精-伊紅染色及倒置相差顯微鏡觀察后，細胞形態(tài)符合成骨細胞形態(tài)學特征。經(jīng)過堿性磷酸酶及茜素紅染色后，結果符合成骨細胞特性。體外可借助管狀支架構建一定管狀形態(tài)的成骨細胞膜片。基因檢測結果顯示：組間比較時，第一周和第二周成骨細胞膜片中BMP-2mRNA表達量實驗組均高于對照組，其中，以50㎎/L組表達量最高（第一周P＜

4、0.05；第二周P＞0.05）；第一周和第二周成骨細胞膜片中整合素β1mRNA表達量實驗組均低于對照組（第一周和第二周均P＜0.05）。組內(nèi)比較時，各組成骨細胞膜片中BMP-2和整合素β1mRNA表達量第二周均高于第一周（BMP-2各組P＜0.05；整合素β1BD兩組P＜0.05，AC兩組P＞0.05）。
　　結論：本次研究采用機械刮取法能夠獲得具有一定強度的成骨細胞膜片?？箟难釋Τ晒羌毎て臉嫿ň哂写龠M作用，其中，以50㎎/