葛根素對(duì)大鼠成骨細(xì)胞OPG和RANKL mRNA表達(dá)影響的研究.pdf

1、研究目的：
　　 本課題通過(guò)建立大鼠成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?在細(xì)胞和分子水平上觀察葛根素對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖、分化及基因表達(dá)的影響,探討葛根素防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)制,為葛根素應(yīng)用于臨床防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.采用多次酶消化法分離新生24h內(nèi)大鼠顱蓋骨進(jìn)行大鼠原代成骨細(xì)胞體外培養(yǎng),通過(guò)相差顯微鏡觀察成骨細(xì)胞形態(tài),并用堿性磷酸酶染色方法對(duì)所獲得的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　

2、 2.采用MTT法觀察葛根素對(duì)大鼠成骨細(xì)胞的影響
　　 3.采用RT-PCR的方法觀察葛根素對(duì)大鼠體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞OPG和RANKLmRNA表達(dá)的影響
　　 結(jié)果：
　　 1.新生大鼠成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)模型建立成功,證實(shí)所培養(yǎng)細(xì)胞具有體內(nèi)成骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特性。
　　 2.不同濃度的葛根素(10-4μmol/L～100μmol/L)作用于大鼠成骨細(xì)胞24h和48h均表現(xiàn)出顯著的促增殖作用:培養(yǎng)72h及

3、96h,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各濃度組均無(wú)明顯的增殖作用。
　　 3.葛根素可明顯地促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞OPGmRNA的表達(dá),抑制RANKLmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1.不同濃度的葛根素作用于大鼠成骨細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的增殖作用,其增殖的大小與葛根素濃度及作用時(shí)間有密切的關(guān)聯(lián)。
　　 2.葛根素可以上調(diào)OPG基因的表達(dá),下調(diào)RANKL基因的表達(dá),從而調(diào)節(jié)骨吸收,這可能是葛根素防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的重要機(jī)制之一。