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文檔簡介
1、目的:通過觀察針刺大鼠血清對離體培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠成骨細胞OPG、RANKL mRNA和蛋白表達的影響,探究針刺對骨代謝信號通路OPG/RANKL/RANK的作用,以期為針刺治療骨質(zhì)疏松癥提供理論基礎(chǔ)。
方法:將60只SPF級雌性SD大鼠隨機分為空白組、假手術(shù)組、模型組、藥物組、針刺組,每組12只。空白組不予任何處理;假手術(shù)組只切開暴露雙側(cè)卵巢,但不摘除;模型組、藥物組、針刺組均采用外科手術(shù)摘除其雙側(cè)卵巢,飼養(yǎng)3個月后檢測骨密
2、度和骨礦物含量??瞻捉M不予任何治療方法,正常飼養(yǎng);模型組、假手術(shù)組除灌服與藥物組相同體積的蒸餾水外,正常飼養(yǎng);藥物組以1mL/100g標準灌胃給予0.02mg/mL戊酸雌二醇片水溶液;針刺組選取穴位“三陰交”,“足三里”,“脾俞”,“腎俞”針刺,接入電針30min,同時灌服與藥物組同體積的蒸餾水。1次/d,連續(xù)治療5d,間隔2d,20d為1療程。治療3療程后檢測各組大鼠全身骨密度,判定治療效果。隨后,麻醉大鼠,經(jīng)心臟部位采血。血液經(jīng)4℃
3、冷置1h、離心(2500r/min,25min)、56℃水浴滅活、0.22um濾網(wǎng)抽濾除菌,得到效應血清。取10只出生2d內(nèi)的SD大鼠乳鼠,分離顱骨后采用膠原酶消化法分離得到成骨細胞。原代成骨細胞進行爬片培養(yǎng)24h后,將效應血清以10%的比例(效應血清:成骨細胞培養(yǎng)基=1:10)加入其中。培養(yǎng)3d后,以4%的多聚甲醛(原位雜交爬片采用含有1/1000 DEPC的多聚甲醛)固定各組爬片。成骨細胞內(nèi)OPG、RANKL mRNA的表達量采用原
4、位雜交法檢測;成骨細胞內(nèi)OPG、RANKL蛋白的表達量采用免疫細胞化學染色法檢測。
結(jié)果:
1.SD大鼠切除雙側(cè)卵巢飼養(yǎng)3個月后,全身骨密度檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),去卵巢大鼠全身骨密度和骨礦物含量均顯著低于空白組(P<0.01),證明骨質(zhì)疏松癥模型建立成功。當治療3個療程后,針刺和藥物治療均顯著提高了大鼠全身骨密度和骨礦物含量,與模型組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),其中以針刺治療效果好。
2.成骨細胞內(nèi)OPG原
5、位雜交檢測結(jié)果:與空白組相比,模型組OPG mRNA表達量顯著下降(P<0.01);與假手術(shù)組相比,模型組OPG mRNA表達量顯著降低(P<0.01);經(jīng)過藥物或針刺處理后,OPG mRNA表達量顯著升高,與模型組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
3.成骨細胞內(nèi)RANKL原位雜交結(jié)果:與空白組相比,模型組RANKL mRNA表達量顯著升高(P<0.01);與假手術(shù)組相比,模型組RANKL mRNA表達量顯著上升(P<0.
6、01);經(jīng)過藥物或針刺處理后,RANKL mRNA表達量顯著降低,與模型組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
4.成骨細胞內(nèi)OPG免疫細胞化學染色結(jié)果:與空白組相比,模型組OPG蛋白表達量顯著下降(P<0.01);與假手術(shù)組相比,模型組OPG蛋白表達量顯著降低(P<0.01);經(jīng)過藥物或針刺處理后,OPG蛋白表達量顯著升高,與模型組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
5.成骨細胞內(nèi)RANKL免疫細胞化學染色結(jié)果:
7、與空白組相比,模型組RANKL蛋白表達量顯著升高(P<0.01);與假手術(shù)組相比,模型組RANKL蛋白表達量顯著上升(P<0.01);經(jīng)過藥物或針刺處理后,RANKL蛋白表達量顯著降低,與模型組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
結(jié)論:針刺治療能夠顯著提高大鼠全身骨密度和骨礦物含量,同時針刺大鼠效應血清能夠明顯提高成骨細胞內(nèi)OPG mRNA,蛋白的表達量;同時,亦能降低成骨細胞內(nèi)RANKL mRNA,蛋白的表達量。本研究提示
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