葛根素對小鼠成骨細(xì)胞TGF-β-Smad基因蛋白表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:
　　探究葛根素干預(yù)液對小鼠胎鼠成骨細(xì)胞TGF-β1及Smad2/3基因表達(dá)的影響，從細(xì)胞學(xué)層面和分子生物學(xué)層面研究葛根素治療骨質(zhì)疏松癥的機(jī)理，為葛根素治療骨質(zhì)疏松癥提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　取小鼠胎鼠成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)并進(jìn)行傳代。分別用1ug/ml，0.1ug/ml，0.01ug/ml濃度的葛根素干預(yù)組及空白DMEM對照組作用于成骨細(xì)胞，在成骨細(xì)胞生長成熟后，運(yùn)用堿性磷酸酶法（AKP法）及四甲基偶

2、氮唑鹽法(MTT法）檢測各組干預(yù)后成骨細(xì)胞的活性。檢測出最適宜的干預(yù)時(shí)間作用細(xì)胞活性最高的組別后，提取出成骨細(xì)胞內(nèi)mRNA，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR法及WesternBloting法檢測葛根素干預(yù)液對成骨細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路TGF-β1以及Smad2/3基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　細(xì)胞AKP實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示出葛根素干預(yù)液能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞生長，并且該活性的促進(jìn)與濃度及時(shí)間相依賴性。實(shí)時(shí)定量熒光PCR及WesternB

3、loting結(jié)果均顯示不同濃度的葛根素干預(yù)液能明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞生長轉(zhuǎn)化因子TGF-β1基因表達(dá)，而且在促進(jìn)Smad2及Smad3的表達(dá)時(shí)與TGF-β1相平行，與干預(yù)液的濃度相依賴。
　　結(jié)論:
　　葛根素可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的增值及TGF-β1的表達(dá)，其下游信號Smad2/3的表達(dá)也得到促進(jìn)。Smad2/3的信號表達(dá)與TGF-β1的表達(dá)相一致。說明葛根素能夠通過TGF-β1及Smad2/3系統(tǒng)促進(jìn)成骨細(xì)胞的生長，促進(jìn)骨量增殖，進(jìn)