雌激素對成骨細胞增殖及TGF-β1和IGF-1基因表達的影響.pdf

1、目的：
　　1、觀察雌二醇在體外對大鼠顱蓋骨成骨細胞的增殖情況。
　　2、研究不同濃度的雌二醇對體外大鼠顱蓋骨成骨細胞TGF-β1和IGF-1mRNA表達的影響。
　　3、初步探討雌二醇對成骨細胞的作用機制。
　　方法：
　　1、采用酶消化法體外分離、培養(yǎng)原代大鼠成骨細胞，鏡下觀察其形態(tài)、并對其進行特征性染色的鑒定。
　　2、以原代培養(yǎng)大鼠成骨細胞為實驗模型，分空白組和對照組(0、10-9、10-8、

2、10-7、10-6、10-5M)。雌二醇的作用濃度參考文獻[1]。用不同濃度的雌二醇刺激成骨細胞24h,分別用MTT法測定成骨細胞的增殖情況。采用實時熒光定量PCR法測定TGF-β1和IGF-1mRNA表達情況。
　　3、采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件，對實驗所得數(shù)據(jù)進行分析,結果用均數(shù)±標準差(x±s)表示。組間的比較采用LSD法分析，當P＜0.05時，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、體外培養(yǎng)大鼠成骨細胞，植

3、入24h后的細胞充分鋪展形態(tài)多樣呈梭形、三角形、多角型或不規(guī)則型。胞核呈圓形居中或偏于一側，周圍的細胞則以突起相連接。堿性磷酸酶染色呈陽性，胞漿呈灰黑色塊狀染色顆粒；茜素紅染色呈陽性，可見多層重疊、大小不一的橘紅色結節(jié)。
　　2、不同濃度的雌二醇作用于成骨細胞24h后，MTT比色法測定10-9mol/L~10-6mol/L濃度的雌二醇均可促進成骨細胞的增殖，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其中10-7mol/L為最高峰值;10-

4、5mol/L組與對照組比較有抑制作用，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　3、不同濃度的雌二醇作用于成骨細胞24h后，通過實時熒光定量PCR法檢測成骨細胞中TGF-β1、IGF-1mRNA的表達均增加，在一定濃度范圍內(nèi)且呈劑量依賴關系。對照組與實驗組進行比較，實驗組組間進行比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：
　　1、雌激素可以促進成骨細胞的增殖。
　　2、雌激素可以增加TGF-β1和IG