雌激素對(duì)成骨細(xì)胞增殖及TGF-β1和IGF-1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　1、觀察雌二醇在體外對(duì)大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞的增殖情況。
　　2、研究不同濃度的雌二醇對(duì)體外大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞TGF-β1和IGF-1mRNA表達(dá)的影響。
　　3、初步探討雌二醇對(duì)成骨細(xì)胞的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、采用酶消化法體外分離、培養(yǎng)原代大鼠成骨細(xì)胞，鏡下觀察其形態(tài)、并對(duì)其進(jìn)行特征性染色的鑒定。
　　2、以原代培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停挚瞻捉M和對(duì)照組(0、10-9、10-8、

2、10-7、10-6、10-5M)。雌二醇的作用濃度參考文獻(xiàn)[1]。用不同濃度的雌二醇刺激成骨細(xì)胞24h,分別用MTT法測(cè)定成骨細(xì)胞的增殖情況。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定TGF-β1和IGF-1mRNA表達(dá)情況。
　　3、采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。組間的比較采用LSD法分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，植

3、入24h后的細(xì)胞充分鋪展形態(tài)多樣呈梭形、三角形、多角型或不規(guī)則型。胞核呈圓形居中或偏于一側(cè)，周圍的細(xì)胞則以突起相連接。堿性磷酸酶染色呈陽(yáng)性，胞漿呈灰黑色塊狀染色顆粒；茜素紅染色呈陽(yáng)性，可見多層重疊、大小不一的橘紅色結(jié)節(jié)。
　　2、不同濃度的雌二醇作用于成骨細(xì)胞24h后，MTT比色法測(cè)定10-9mol/L~10-6mol/L濃度的雌二醇均可促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中10-7mol/L為最高峰值;10-

4、5mol/L組與對(duì)照組比較有抑制作用，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3、不同濃度的雌二醇作用于成骨細(xì)胞24h后，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)成骨細(xì)胞中TGF-β1、IGF-1mRNA的表達(dá)均增加，在一定濃度范圍內(nèi)且呈劑量依賴關(guān)系。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)組組間進(jìn)行比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、雌激素可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。
　　2、雌激素可以增加TGF-β1和IG