聯(lián)合應(yīng)用BMP-2和BMP-7對(duì)大鼠乳鼠成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響.pdf

1、目的： ①建立一種簡(jiǎn)單，快速，成活率和純度高的原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)方法，以獲得大量成骨細(xì)胞，為骨組織工程研究奠定基礎(chǔ)。 ②探討聯(lián)合應(yīng)用骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7（BMP-7）對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。 方法： ①無(wú)菌采取5日齡SD大鼠的顱蓋骨，采用改良的二次酶消化法分離成骨細(xì)胞，通過(guò)倒置相差顯微鏡觀察，并用堿性磷酸酶和礦化結(jié)節(jié)染色鑒定，利用微量滴定（MTT）法測(cè)定一個(gè)培養(yǎng)周期的成骨

2、細(xì)胞活性分布。 ②培養(yǎng)的成骨細(xì)胞單獨(dú)應(yīng)用BMP-2和BMP-7以及聯(lián)合應(yīng)用BMP-2和BMP-7作用48h后，用MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖，同時(shí)測(cè)定成骨細(xì)胞裂解液中堿性磷酸酶（ALP）活性和骨鈣素（OCN）含量。 結(jié)果： ①倒置相差顯微鏡形態(tài)觀察結(jié)果顯示：未貼壁的細(xì)胞呈圓形，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞呈不規(guī)則梭形、三角形或多角形，單核，有1～3個(gè)核仁；堿性磷酸酶和鈣化結(jié)節(jié)染色均呈陽(yáng)性（陽(yáng)性率≥98．06%）；MTT法結(jié)合形態(tài)學(xué)

3、觀察結(jié)果顯示，成骨細(xì)胞培養(yǎng)至第10d時(shí)活性最強(qiáng)。 ②單獨(dú)應(yīng)用BMP-2和BMP-7，聯(lián)合應(yīng)用BMP-2和BMP-7作用48h后，均能刺激大鼠乳鼠成骨細(xì)胞的增殖，增加成骨細(xì)胞ALP活性和OCN含量。聯(lián)合應(yīng)用BMP-2和BMP-7作用后，與對(duì)照組，單獨(dú)應(yīng)用BMP-2和BMP-7組比較，能明顯增強(qiáng)成骨細(xì)胞生物學(xué)活性，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有顯著差異性，P<0．05。 結(jié)論： ①用改良的二次酶消化法能夠在短時(shí)間內(nèi)獲得大量成骨細(xì)胞，