依普黃酮及雌二醇對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠下頜骨成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響.pdf

1、很多研究表明，骨質(zhì)疏松導(dǎo)致的頜骨骨量減少是口腔種植失敗的重要原因之一，因此，有效的防治骨質(zhì)疏松成為口腔醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。全身用藥雖然可以增加頜骨的骨密度，從而提高種植體成功率，但弊端也很大。為此，劉洪臣提出的人工種植牙給藥系統(tǒng)為防治骨質(zhì)疏松和提高種植體成功率提供了很好的途徑。在治療骨質(zhì)疏松藥物中，雌二醇及依普黃酮聯(lián)合應(yīng)用有望成為理想的治療藥物，所以本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究骨質(zhì)疏松患者種植體周圍靶細(xì)胞-骨質(zhì)疏松頜骨成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的變化和雌二醇及依

2、普黃酮對(duì)其的影響，為人工種植牙給藥系統(tǒng)提供一定的實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。 第一部分、骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的建立和頜骨與全身骨質(zhì)疏松的關(guān)系。 目的：建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型，研究頜骨骨質(zhì)疏松與全身的關(guān)系。 方法：采用摘除大鼠雙側(cè)卵巢的方法建立動(dòng)物骨質(zhì)疏松模型，通過(guò)檢測(cè)體重、股骨腰椎骨密度、血清指標(biāo)的方法確定骨質(zhì)疏松模型是否建立。通過(guò)檢測(cè)頜骨骨密度和組織切片判斷頜骨骨質(zhì)疏松的情況。 結(jié)果：在術(shù)后4w時(shí)，ovx組的大鼠體重

3、比sham組顯著增加，腰椎和股骨出現(xiàn)骨密度下降，血清中鈣出現(xiàn)降低，而堿性磷酸酶和骨鈣素出現(xiàn)了升高。下頜骨在術(shù)后4w先出現(xiàn)升高，上頜骨在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中未出現(xiàn)顯著的骨密度變化，但是兩者在術(shù)后均呈現(xiàn)了降低的趨勢(shì)。HE組織切片顯示下頜骨ovx組骨小梁明顯減少，排列稀疏。 結(jié)論：骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型成功建立，頜骨的變化與全身骨質(zhì)疏松有關(guān)。 第二部分、去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞增殖分化能力的變化。 目的：探討大鼠術(shù)后4w和12w下頜骨

4、成骨細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及增殖分化礦化能力的變化。 方法：采用酶消法和組織塊法聯(lián)合培養(yǎng)成骨細(xì)胞，用堿性磷酸酶染色、Ⅰ型膠原染色和茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色鑒定成骨細(xì)胞。通過(guò)檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖、堿性磷酸酶、骨鈣素、鈣磷鎂的吸收和鈣結(jié)節(jié)比較增殖分化能力的變化。采用RT-PCR和Western Blot的方法檢測(cè)PCNA基因蛋白的表達(dá)。用透射電鏡觀察成骨細(xì)胞微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果：所培養(yǎng)細(xì)胞堿性磷酸酶、Ⅰ型膠原和茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色均為陽(yáng)性。術(shù)后

5、4w ovx組成骨細(xì)胞增殖能力和堿性磷酸酶活性就出現(xiàn)了明顯的升高；術(shù)后12w時(shí)ovx組成骨細(xì)胞增殖能力、堿性磷酸酶活性、骨鈣素、PCNA基因蛋白的表達(dá)均比sham組高。透射電鏡的結(jié)果顯示12w的ovx組成骨細(xì)胞線粒體和異染色質(zhì)明顯增多，而sham組溶酶體等黑色顆粒和白色小泡較多。 結(jié)論：大鼠去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞的增殖分化能力出現(xiàn)了明顯增加。 第三部分、去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞職和UCP2表達(dá)的變化 目的：探討術(shù)后4w

6、和12w下頜骨成骨細(xì)胞ER和UCP2的表達(dá)。 方法：采用RT-PCR和Western Blot檢測(cè)ER和UCP2的表達(dá)變化。 結(jié)果：成骨細(xì)胞表達(dá)了UCP2，且ovx組表達(dá)的UCP2比sham組明顯減少。ER在ovx組的基因表達(dá)高于sham組。 結(jié)論：成骨細(xì)胞ER和UCP2表達(dá)的改變可能與骨質(zhì)疏松增殖分化能力變化的機(jī)制有關(guān)。 第四部分、依普黃酮及雌二醇對(duì)骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。 目的：探討

7、雌二醇及依普黃酮聯(lián)合作用對(duì)骨質(zhì)疏松性成骨細(xì)胞增殖分化的影響和相關(guān)基因蛋白的表達(dá)。 方法：檢測(cè)不同藥物濃度對(duì)于骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞的增殖能力和堿性磷酸酶的影響，確定最大促進(jìn)作用的藥物濃度，用RT-PCR和Western Blot方法檢測(cè)藥物對(duì)于UCP2、PCNA和ER表達(dá)的影響。 結(jié)果：所選濃度的雌二醇和依普黃酮均可以增加骨質(zhì)疏松性成骨細(xì)胞的增殖分化能力，未見(jiàn)抑制現(xiàn)象。并且兩種藥物均促進(jìn)UCP2和PCNA的表達(dá)，但聯(lián)合用藥時(shí)表