羅格列酮對OLETF大鼠股骨骨密度及成骨細胞BMP-2和Bco-xL表達的影響.pdf

1、目的:
　　 糖尿病(DM)是目前繼心臟病、腫瘤嚴重危害人們健康的疾病，隨著老齡化社會的到來，糖尿病發(fā)病率逐年增加。糖尿病性骨質(zhì)疏松(DOP)屬于繼發(fā)性骨質(zhì)疏松(OP)，是DM最常見的一種并發(fā)癥，伴隨營養(yǎng)、代謝、內(nèi)分泌等多因素的變化而發(fā)生的一系列病理性改變。
　　 OLETF鼠是一種自發(fā)性2型糖尿病大鼠，本實驗以OLETF鼠作為2型糖尿病模型，以LETO鼠和攝入羅格列酮的OLETF鼠作為其對照，通過觀察大鼠股骨病理變化、

2、測定骨密度(BMD)及成骨細胞骨形成蛋白-2(BMP-2)、Bcl-xL表達水平，來探討2型糖尿病本身對骨及羅格列酮對糖尿病大鼠骨的影響及特點。
　　 方法:
　　 大鼠在無特定病原體(SPF)級條件下單籠飼養(yǎng)，飼以標準飼料，12/12h光照黑暗循環(huán)，自由獲取食物和飲水。定期行口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)監(jiān)測血糖，以血糖峰值>16.7 mmol/L和負荷后120 min血糖>11.1 mmol/L診為糖尿病，只具備上述

3、1條為糖耐量減低。至30周時，共有成模OLETF大鼠12只，隨機分為糖尿病對照(DM)組、羅格列酮(RGZ)組(每組6只)，8只LETO鼠為正常對照(NC)組。RGZ組：羅格列酮以蒸餾水溶解稀釋，給藥劑量為3mg/kg·d。DM組與NC組以等量蒸餾水灌胃，各組均灌胃給藥12周，每日1次。
　　 處死大鼠，取大鼠離體的左右后肢股骨，仔細剝離表面附著的軟組織，避免損傷骨表面。左后肢股骨用磷酸鹽緩沖鹽水浸濕的紗布包裹后-20℃保存?zhèn)渥?/p>

4、BMD、骨膠原含量及骨灰干重比的檢測。右后肢股骨置于10％中性福爾馬林溶液中固定后用10％EDTA脫鈣備做HE及成骨細胞BMP-2、Bcl-xL免疫組化染色。應用多媒體分析軟件進行骨組織形態(tài)計量學分析，采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠一般狀況比較：OLETF大鼠較LETO肥胖、活動遲緩、懶動、精神萎頓、少動閉眼、弓背蜷縮、喜扎堆、畏寒喜暖、毛色干枯無光澤。
　　 2.股骨BM

5、D比較：與DM組[(0.198±0.011)g/cm2]相比，NC組BMD[(0.220±0.012)g/cm2]升高(P<0.01)，RGZ組BMD[(0.172±0.012)g/cm2]降低(P<0.01)。
　　 3.骨灰干重比：與DM組(0.521±0.012)相比，NC組股骨灰干重比(0.538±0.018)升高(P<0.05)，RGZ組(0.492±0.011)股骨灰干重比降低(P<0.01)。
　　 4.股

6、骨脫鈣狀況比較：與DM組相比，NC組股骨脫鈣時間延長，(骨重-脫鈣后骨重)/骨重比值升高，相比有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。而RGZ組相對于DM組脫鈣時間縮短，(骨重-脫鈣后骨重)/骨重比值降低，相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 5.空骨細胞陷窩率、成骨細胞(OB)和破骨細胞(OC)計數(shù)變化：與DM組相比，NC組空骨細胞陷窩率及OC計數(shù)降低(P<0.01或P<0.05)，OB計數(shù)升高(P<0.01)。RGZ組相對于DM組

7、空骨細胞陷窩率及OC計數(shù)升高(P<0.01)，OB計數(shù)降低(P<0.05)。
　　 6.股骨膠原含量比較：與DM組[(185.60±19.38)mg/g]相比，NC組股骨膠原含量[(243.27±22.19)mg/g]升高(P<0.01)，RGZ組[(158.81±17.65)mg/g]翻降低(P<0.05)。
　　 7.成骨細胞Bcl-xL表達變化：與DM組(84.83±10.82)相比，NC組成骨細胞Bcl-xL陽性

8、表達平均灰度值(69.13±11.56)降低(P<0.05)，RGZ組成骨細胞Bcl-xL陽性表達平均灰度值(110.17±15.33)升高(P<0.01)。
　　 8.成骨細胞BMP-2表達變化：RGZ組成骨細胞BMP-2陽性表達的吸光度值(0.4247±0.0321)明顯低于DM組(0.4886±0.0398)，而DM組陽性表達的吸光度值明顯低于NC組(0.5571±0.0402)，結(jié)果有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

9、　　 結(jié)論:
　　 1.該模型大鼠明顯肥胖，可作為研究2型糖尿病骨代謝紊亂的理想動物模型。
　　 2.糖尿病狀態(tài)下大鼠表現(xiàn)為骨密度和骨量減少，大鼠可出現(xiàn)明顯的骨組織形態(tài)結(jié)構異常，成骨細胞功能障礙可能是糖尿病骨代謝失衡的主要機制，但破骨細胞也可能參與其中。
　　 3.該糖尿病模型大鼠存在骨膠原代謝異常和結(jié)構紊亂，前者表現(xiàn)為骨膠原的合成及含量減少，后者表現(xiàn)為骨膠原連續(xù)性差且排列不整齊。骨膠原代謝異常可能與成骨細胞數(shù)