五種囊膜病毒七肽重復區(qū)2-Helix蛋白結(jié)構和功能的研究.pdf

1、囊膜病毒通過其囊膜表面的融合蛋白的構象變化來介導病毒囊膜和宿主細胞膜的融合。其中Ⅰ類融合蛋白上的兩段七肽重復(HR1和HR2)區(qū)在此過程中發(fā)揮著十分重要的作用，并且大多數(shù)來自HR區(qū)域的多肽(多為HR2多肽)具有膜融合抑制活性，能有效的抑制病毒入侵宿主細胞。但這類多肽藥物穩(wěn)定性差。本論文選取了五種引起人類或動物重大疾病的病毒：冠狀病毒科的人冠狀病毒229E(HumanCoronavirus229E，HCoV-229E)，傳染性支氣管炎病毒

2、(InfectiousBronchitisVirus,IBV)，傳染性胃腸炎病毒(TransmissibleGastroenteritisVirus,TGEV)，副粘病毒科的Menangle病毒(MenangleVirus，MenV)、麻疹病毒(MeaslesVirus,MeV)為研究對象，進行了一系列的蛋白功能和結(jié)構實驗，闡明了這五種囊膜病毒膜融合的機制，為尋找高效穩(wěn)定的病毒融合抑制物提供了新的方法和思路。本實驗分別利用這五種病毒融合

3、蛋白上的兩段七肽重復序列，人工合成2-Helix蛋白，2-Helix蛋白是指把HR1多肽和HR2多肽用一個氨基酸連接子連接起來，形成一條多肽鏈HR1-Linker-HR2。用GST融合表達體系分別表達這五種病毒的2-Helix蛋白，結(jié)果表明這些2-Helix蛋白都能在大腸桿菌中高效可溶表達。分子篩、圓二色譜實驗證明這些2-Helix蛋白均能形成穩(wěn)定的富含α螺旋的結(jié)構，可形成穩(wěn)定的六螺旋束結(jié)構。結(jié)晶實驗獲得了四種2-Helix蛋白的晶體(

4、IBV除外)，并且獲得了這四種蛋白晶體的X射線衍射數(shù)據(jù)。為利用硒原子的反常散射獲取2-Helix蛋白晶體X-射線衍射的相位信息，在含有硒代甲硫氨酸的M9培養(yǎng)基中用IPTG誘導表達硒代2-Helix蛋白衍生物。經(jīng)MALDI-TOF質(zhì)譜檢測證實2-Helix蛋白硒代甲硫氨酸標記成功。采用與天然2-Helix蛋白晶體生長類似的條件，進行硒代2-Helix蛋白的結(jié)晶實驗，獲得了硒代人冠狀病毒229E2-Helix蛋白的可衍射晶體。為2-Heli