HBV-P區(qū)預(yù)存突變的流行病學(xué)研究及其對初治慢性乙型肝炎患者免疫應(yīng)答的影響.pdf

1、乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)引起的危害人類健康的最常見的傳染病之一。HBV病毒復(fù)制過程以RNA為中間體，參與病毒復(fù)制的由HBV-P區(qū)基因編碼的RNA聚合酶/逆轉(zhuǎn)錄酶（HBV Pol）在逆轉(zhuǎn)錄過程缺乏嚴(yán)格的校正功能，所以造成病毒復(fù)制過程中出現(xiàn)自發(fā)突變的頻率大大升高，導(dǎo)致乙型肝炎患者體內(nèi) HBV病毒產(chǎn)生突變的可能性大大增加。這些未經(jīng)藥物治療而在患者體內(nèi)檢測到的突變位點（我們將其稱為預(yù)存突變）的分布如

2、何、臨床流行病學(xué)特征及其潛在的臨床意義是本論文的主要研究目標(biāo)。
　　本研究采用 PCR測序的方法回顧性分析168例慢性乙型肝炎初治患者中HBV病毒的基因型和HBV聚合酶區(qū)（HBV-P）預(yù)存突變，并進(jìn)一步分析了預(yù)存突變的臨床流行病學(xué)特征。結(jié)果顯示168例慢性乙型肝炎初治患者中有43例檢測到HBV-P區(qū)預(yù)存突變，檢出率為25.6％，突變位點均不在已知核苷（酸）類藥物的耐藥位點之列。HBV-P區(qū)預(yù)存突變組和非突變組在病毒基因型、年齡和性

3、別的分布無明顯差異，起病時HBeAg陽性比例、ALT水平和血清基線HBV DNA水平在兩組間亦未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異。168例初治患者中HBeAg陰性人群較HBeAg陽性人群的基線HBV DNA水平顯著減低（P=0.0112）；其中HBV-P區(qū)預(yù)存突變患者基線HBV DNA水平減低明顯，是造成HBeAg陰性患者基線HBV DNA水平和高病毒拷貝數(shù)患者的比例明顯低于HBeAg陽性人群的主要原因。上述研究結(jié)果提示HBV-P區(qū)預(yù)存突變降低慢性乙型肝

4、炎初治患者HBeAg陰性人群的病毒復(fù)制水平，對該人群組預(yù)存突變的分析有可能成為臨床分類分組的新指標(biāo)之一，在進(jìn)一步分析預(yù)存突變存在和療效關(guān)系的基礎(chǔ)上，有可能需要根據(jù)預(yù)存突變對不同乙型肝炎患者采取不同的治療方案。
　　為進(jìn)一步研究乙型肝炎初治患者預(yù)存突變對免疫應(yīng)答的影響，我們首先比較分析了急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎初治和乙型肝炎后肝硬化患者CD8+T淋巴細(xì)胞在數(shù)量和免疫記憶應(yīng)答水平上的差異。研究結(jié)果表明不同類型乙型肝炎患者外周CD8+

5、記憶性T淋巴細(xì)胞在數(shù)量和應(yīng)答水平上呈現(xiàn)出不同的格局，和正常人群相比，三個不同階段乙型肝炎患者外周未致敏CD8+T淋巴細(xì)胞的比例均顯著降低，而CD45RA-CD8+記憶/活化型 T淋巴細(xì)胞的比例則顯著增高，而且在肝硬化階段未致敏細(xì)胞比例降低更為明顯，記憶/活化細(xì)胞比例升高更為明顯，表明在肝硬化階段，大多數(shù)外周CD8+T淋巴細(xì)胞具有向記憶/活化型細(xì)胞分化的趨勢；同時和慢性乙型肝炎初治患者相比，肝硬化階段外周CD8+T淋巴細(xì)胞不僅在數(shù)量上顯著

6、減少，同時在功能上也呈現(xiàn)低反應(yīng)性，其分泌 IFN-??的能力也基本喪失。上述結(jié)果表明，不同臨床階段乙型肝炎患者中CD8+T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答（和記憶應(yīng)答）呈現(xiàn)不同的狀態(tài)，在免疫清除階段，患者CD8+T或是記憶性CD8+T淋巴細(xì)胞仍然具有一定的有效應(yīng)答能力，當(dāng)發(fā)展至肝硬化階段，CD8+T淋巴細(xì)胞功能則明顯降低。這種細(xì)胞功能的喪失與病毒清除能力減低及疾病的慢性化進(jìn)展可能存在一定關(guān)聯(lián),提高慢性乙型肝炎患者中免疫記憶/活化型CD8+T淋巴細(xì)胞的比

7、例和功能可能成為延緩肝硬化和肝衰竭的有效途徑。
　　利用上述研究結(jié)果，我們進(jìn)一步對其中19例初治慢性乙型肝炎患者外周HBV病毒的基因型和HBV-P區(qū)序列進(jìn)行分析，并結(jié)合患者的免疫應(yīng)答水平，進(jìn)一步探討HBV-P區(qū)預(yù)存突變對宿主免疫應(yīng)答的影響，進(jìn)而影響HBV DNA水平等病毒學(xué)特征。初步研究結(jié)果顯示發(fā)生HBV-P區(qū)預(yù)存突變的患者，其病毒復(fù)制水平與記憶/效應(yīng) T淋巴細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)，同時與初始未致敏 T淋巴細(xì)胞呈正相關(guān)。上述結(jié)果提示 HBV