日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）卵黃蛋白原合成的初步研究.pdf

1、甲殼綱十足目卵巢中卵黃蛋白的來源，在過去的幾十年研究中一直存在爭議，內(nèi)源性合成和外源性合成均有報道，不同發(fā)育階段中內(nèi)源和外源性合成的相對比重也有不同。本文以日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)為對象，初步探討其卵巢發(fā)育不同階段的特征、卵黃蛋白原的合成部位以及相對合成量。由實驗中所收集到的日本沼蝦其卵巢的組織學(xué)切片中一共可以見到四類不同發(fā)育階段的卵細(xì)胞：卵原細(xì)胞--細(xì)胞體積很小，細(xì)胞核幾乎占據(jù)整個細(xì)胞；發(fā)育期的卵母細(xì)

2、胞---細(xì)胞直徑約95μm，核占細(xì)胞一半左右；膨大期的卵母細(xì)胞---細(xì)胞直徑約為140μm，核占細(xì)胞的1/4～1/3；成熟期卵母細(xì)胞---細(xì)胞直徑大于300μm，核只有細(xì)胞的1/10左右，細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)大量嗜酸性卵黃顆粒。結(jié)合卵巢外部形態(tài)特征觀察、性腺指數(shù)和上述組織學(xué)研究結(jié)果，分別統(tǒng)計各個卵巢切片中不同發(fā)育期的卵細(xì)胞，將最大比例的一類卵細(xì)胞所代表的發(fā)育階段定為該研究個體的發(fā)育期，最終將本文實驗所用日本沼蝦的卵巢發(fā)育分為五期：卵黃發(fā)生前期、

3、初級卵黃發(fā)生期、次級卵黃發(fā)生期、成熟期和抱卵期(消退期)。 將處于不同卵巢發(fā)育期的日本沼蝦卵巢和肝胰腺分別提取總RNA，用RT-PCR的方法研究日本沼蝦卵巢和肝胰腺卵黃蛋白原mRNA的表達(dá)，首先確定是否分別具有卵黃蛋白原的合成功能。檢測結(jié)果可以初步判定日本沼蝦卵巢和肝胰腺都存在卵黃蛋白原mRNA的表達(dá)，兩者都是卵黃蛋白原的合成部位，同時發(fā)現(xiàn)其合成量與卵巢的發(fā)育階段存在相關(guān)。再利用半定量RT-PCR的方法研究卵黃蛋白原在不同卵巢發(fā)

4、育階段中在兩種組織中的相對表達(dá)量，結(jié)果顯示，在卵黃發(fā)生前期卵黃蛋白原mRNA在卵巢和肝胰腺中的表達(dá)都較弱；隨著卵巢的發(fā)育，卵黃蛋白原mRNA在兩者中的相對表達(dá)量都在增加，在抱卵期相對表達(dá)量達(dá)到最高，且到后期肝胰腺的表達(dá)量增加尤其明顯。上述結(jié)果表明，在卵巢發(fā)育前期，卵巢和肝胰腺合成卵黃蛋白原的能力都較弱，隨著發(fā)育的進(jìn)行，卵巢和肝胰腺合成卵黃蛋白原的能力都在增加，并在抱卵期達(dá)到最大，且到后期肝胰腺卵黃蛋白原合成能力的增加尤其明顯。