EphA2基因和E-cadherin在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其相關(guān)性研究.pdf

1、膠質(zhì)瘤（Gliomas）是顱內(nèi)最常見的原發(fā)性神經(jīng)上皮性惡性腫瘤，約占腦腫瘤的44.5%，其發(fā)病率高、容易復(fù)發(fā)是目前治療上的難題。近年來，隨著顯微外科的迅猛發(fā)展，手術(shù)醫(yī)生的經(jīng)驗(yàn)積累，膠質(zhì)瘤的手術(shù)治療較以往有了很大幅度的提高，但由于膠質(zhì)瘤細(xì)胞呈浸潤性生長，加之出于手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)后的考慮，所以目前很難達(dá)到在顯微鏡下完全切除腫瘤，從而遺留腫瘤復(fù)發(fā)的可能。放射治療、化學(xué)藥物治療有一定延緩腫瘤復(fù)發(fā)的作用，但其副作用大、耐受性差，而且效果一般欠佳，使其

2、在治療上受到一定的限制，諸多因素導(dǎo)致膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)率高、預(yù)后差，其中位生存期一般不超過12個(gè)月。因此，尋找有效的能提高膠質(zhì)瘤患者預(yù)后和生存質(zhì)量的治療措施迫在眉睫。 膠質(zhì)瘤是人類所罹患的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高、預(yù)后差、死亡率高給無數(shù)幸福家庭帶來災(zāi)難性的打擊，現(xiàn)有的研究已經(jīng)從多方面來認(rèn)識和了解膠質(zhì)瘤，包括：癌基因與抑癌基因的發(fā)現(xiàn)，侵襲和生長機(jī)制的研究，放射治療及化學(xué)藥物治療的研究等，并取得了許多可喜的成績，而腫瘤的發(fā)生多是由于

3、細(xì)胞間信號傳導(dǎo)功能異常造成的細(xì)胞異常增殖或不能發(fā)生凋亡，從腫瘤的發(fā)生學(xué)上來尋找治療腫瘤的措施是目前的研究熱點(diǎn)。 受體型酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTK）是蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）中的一種，是外界刺激信息傳遞給細(xì)胞核，轉(zhuǎn)化成細(xì)胞效應(yīng)的信號通路的關(guān)鍵組成，參與細(xì)胞生長、增殖、轉(zhuǎn)化及胚胎發(fā)育和腫瘤形成。各種刺激信息通過一系列信號傳導(dǎo)最終啟動絲裂原活化的

4、蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase MAPK）途徑的活化，促進(jìn)細(xì)胞增殖和存活。MAPK途徑是介導(dǎo)細(xì)胞增殖、活化信號的一條重要途徑，許多細(xì)胞因子、生長因子及各種刺激下細(xì)胞反應(yīng)等主要是通過此條途徑實(shí)現(xiàn)的。按照氨基酸序列和空間結(jié)構(gòu)，受體型酪氨酸激酶可分為九類，Eph（Erythropoietin Producing Hepatocellular）樣RTK是其中的一個(gè)亞族，而EphA2（Erythropo

5、ietin Producing Hepatocellular A2）是Eph亞家族受體成員中被發(fā)現(xiàn)具有酪氨酸激酶活性的第1個(gè)基因編碼產(chǎn)物，是Lindberg于1990年用簡并引物從人角化上皮細(xì)胞在cDNA文庫中篩選得到的，人類EphA2基因定位于1p36.1。 研究發(fā)現(xiàn)：EphA2可以通過信號傳導(dǎo)參與胚胎發(fā)育，尤其是神經(jīng)系統(tǒng)及血管系統(tǒng)的發(fā)生和發(fā)育，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化，維持細(xì)胞之間的粘附，促進(jìn)血管的增生和調(diào)節(jié)血管的存活。而EphA

6、2異常表達(dá)時(shí)同樣可以通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、血管生成、侵襲、浸潤和轉(zhuǎn)移。多項(xiàng)研究表明：在許多上皮來源的惡性腫瘤中，如：胃癌、肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等，EphA2都呈過表達(dá)，表明EphA2在惡性腫瘤中的表達(dá)具有共性，并且與腫瘤的病理分級，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，可能為惡性腫瘤治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。EphA2在許多惡性腫瘤中呈高表達(dá)目前認(rèn)為主要原因是：（1）.缺乏穩(wěn)定的細(xì)胞連接：在腫瘤組織中細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)之間

7、缺乏穩(wěn)定的細(xì)胞連接，EphA2不能很好的與其配體正常結(jié)合而影響其磷酸化；（2）異常黏附：腫瘤細(xì)胞之間的黏附異常可以導(dǎo)致EphA2及其配體異常定位并加重EphA2不能與其配體正常結(jié)合、啟動磷酸化，從而引起EphA2的積聚；（3）配體減少；（4）酪氨酸激酶的活化抑制EphA2的磷酸化。細(xì)胞粘附分子的表達(dá)減少或缺乏及異常黏附是目前認(rèn)為導(dǎo)致EphA2不能正常和其配體結(jié)合而發(fā)生磷酸化、降解的主要原因[8，9，10]。 膠質(zhì)瘤是神經(jīng)上皮來源

8、的惡性腫瘤之一，研究表明：EphA2在膠質(zhì)瘤組織中也呈高表達(dá)[11，12]，并且與腫瘤的惡性程度及病理分級密切相關(guān)，而對于其與細(xì)胞黏附分子的研究及不同種類膠質(zhì)瘤組織中EphA2的表達(dá)目前暫未見相關(guān)研究報(bào)道。 E-鈣黏素即上皮性鈣黏蛋白（E-cadherin，E-cad），是一種常見的細(xì)胞黏附分子，于1995年由Berx首先克隆出來，是目前被公認(rèn)的抑癌因子，其抑癌作用是E-cad通過介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞正常黏附，維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定及細(xì)

9、胞間的正常信號傳導(dǎo)，使細(xì)胞能正常有序增殖、分化，避免細(xì)胞失控性生長，從而抑制腫瘤的形成來完成。 EphA2正常表達(dá)時(shí)可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附、運(yùn)動，維持細(xì)胞骨架的穩(wěn)定，致正常的細(xì)胞信號傳導(dǎo)；而EphA2過表達(dá)時(shí)可加劇細(xì)胞與細(xì)胞之間的異常黏附，促進(jìn)腫瘤的形成，加速腫瘤的侵襲、浸潤、轉(zhuǎn)移。國內(nèi)目前對于EphA2的研究尚處于起步階段，主要集中于其在惡性腫瘤中的蛋白及mRNA的表達(dá)，而對于其與細(xì)胞黏附分子的研究鮮見報(bào)道。研究表明：E-cad

10、是EphA2與細(xì)胞黏附分子作用中最常見的黏附分子，EphA2通過與E-cad的相互作用而影響細(xì)胞之間及細(xì)胞與基質(zhì)間的黏附。研究發(fā)現(xiàn)：在上皮細(xì)胞中，EphA2與E-cad協(xié)同定位于細(xì)胞間接觸位點(diǎn)，E-cad通過介導(dǎo)細(xì)胞正常黏附、調(diào)控EphA2與配體的正常結(jié)合與后續(xù)降解，從而調(diào)控EphA2的功能轉(zhuǎn)化及表達(dá)。E-cad缺乏或表達(dá)降低將影響EphA2受體與配體的表達(dá)和亞細(xì)胞定位，進(jìn)而影響EphA2的降解及信號傳導(dǎo)。亦有實(shí)驗(yàn)研究表明在諸如對肝癌、

11、胃癌、卵巢癌等惡性腫瘤的研究中，EphA2與E-cad的蛋白表達(dá)存在著明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系，共同起著對惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲及惡性轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。但是，二者在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及相互關(guān)系國內(nèi)尚無相關(guān)報(bào)道。本文用免疫組織化學(xué)的方法同時(shí)檢測不同級別、不同種類膠質(zhì)瘤組織中EphA2和E-cad的蛋白表達(dá)情況及在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用，從定性上明確二者之間是否存在相互關(guān)系，為進(jìn)一步從事定量及作用機(jī)制上的研究提供證據(jù)。 目的:探討EphA

12、2與E-cad在人腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中的蛋白表達(dá)及臨床意義。 方法:采用免疫組化SP法同時(shí)檢測59例膠質(zhì)瘤組織和10例正常腦組織中EphA2和E-cad的蛋白表達(dá)。 結(jié)果: 1.59例膠質(zhì)瘤組織和10例正常腦組織中EphA2蛋白的陽性率分別為71.2%（42/59）和10%（1/10），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；膠質(zhì)瘤低級別組（Ⅰ、Ⅱ級）與高級別組（Ⅲ、Ⅳ級）EphA2蛋白的陽性率分別為33.3%（7/

13、21）和92.1%（35/38），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。 2.59例膠質(zhì)瘤組織和10例正常腦組織中E-cad蛋白陽性率分別為30.5%（18/59）和100%（10/10），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；膠質(zhì)瘤低級別組與高級別組E-cad蛋白陽性率分別為57.1%（12/21）和15.5%（6/38），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（0.01

14、有顯著的差異。 4.42例EphA2蛋白表達(dá)陽性膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中，有41例E-cad同時(shí)表達(dá)陰性，1例表達(dá)陽性；而18例E-cad表達(dá)陽性中，有17例EphA2表達(dá)陰性，1例表達(dá)陽性，EphA2與E-cad的蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P<0.01，rs=-0.454）。 結(jié)論: 1.EphA2在膠質(zhì)瘤組織中呈高表達(dá)；E-cad在膠質(zhì)瘤組織呈低表達(dá)；EphA2和E-cad的表達(dá)與膠質(zhì)瘤的病理學(xué)分級密切相關(guān)； 2.E