16S rRNA探針雜交技術(shù)對(duì)瘤胃內(nèi)主要纖維分解菌動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的研究.pdf

1、本研究選擇9只體重相近的安裝永久性瘤胃瘺管的健康蒙古羯羊，分為3組，利用粗飼料分級(jí)指數(shù)(GI)，將混合粗飼料分為高GI組(GI=2.89)、中GI組(GI=1.73)和低GI組(GI=0.65)，試驗(yàn)在精粗比為2：8的條件下進(jìn)行。試驗(yàn)通過(guò)與RDP數(shù)據(jù)庫(kù)中序列配對(duì)，選擇并合成了地高辛標(biāo)記的3種纖維分解菌(黃化瘤胃球菌、白色瘤胃球菌、產(chǎn)琥珀酸擬桿菌)的16SrRNA種特異性寡核苷酸探針和1種細(xì)菌通用探針，以及18SrRNA種特異性的真菌通用

2、探針，與瘤胃內(nèi)容物中分離出的RNA樣品進(jìn)行定量斑點(diǎn)印跡雜交，測(cè)定這3種纖維分解菌的相對(duì)含量和瘤胃真菌數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化。試驗(yàn)期間采集瘤胃液和瘤胃內(nèi)容物樣品，對(duì)瘤胃發(fā)酵指標(biāo)pH值、NH3-N濃度、揮發(fā)性脂肪酸濃度、菌體蛋白進(jìn)行測(cè)定并進(jìn)行動(dòng)態(tài)變化分析。試驗(yàn)建用了16SrRNA定量雜交分析法測(cè)定瘤胃菌體數(shù)量的方法。研究結(jié)果表明： 1.高GI組、中GI組、低GI組三組白色瘤胃球菌的相對(duì)數(shù)量分別為2.69±0.60％、1.80±0.04％、1

3、.77±0.75％，三組黃化瘤胃球菌的相對(duì)數(shù)量分別為2.54±0.55％、1.91±0.29％、3.66±1.10％，三組產(chǎn)琥珀酸擬桿菌的相對(duì)數(shù)量分別為7.71±0.71％、5.27±0.63％、3.63±1.06％。 2.高GI組白色瘤胃球菌、產(chǎn)琥珀酸擬桿菌的相對(duì)數(shù)量最高(p＜0.01)，黃化瘤胃球菌在低GI組飼料條件下是優(yōu)勢(shì)菌(p＜0.01)；3種纖維分解菌的總相對(duì)數(shù)量高GI組＞中GI組、高GI組＞低GI組(p＜0.01)：

4、 3.白色瘤胃球菌在瘤胃細(xì)菌中的相對(duì)數(shù)量為2.09％，黃化瘤胃球菌的相對(duì)數(shù)量為2.70％，產(chǎn)琥珀酸擬桿菌在瘤胃細(xì)菌中的相對(duì)數(shù)量為5.54％。3種纖維分解菌的相對(duì)數(shù)量為10.35％； 4.瘤胃內(nèi)真菌數(shù)量中GI組＞低GI組＞高GI組(p＜0.01)。 5.三種不同品質(zhì)粗飼料條件下，高GI組相對(duì)于中GI組和低GI組，對(duì)瘤胃環(huán)境pH值影響顯著(p＜0.01)，且具有較高的NH3-N濃度(p＜0.01)；高GI組乙酸/丙酸