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文檔簡介
1、目的:
腸道菌群介導(dǎo)代謝、免疫、感染等多個方面,與人體健康密切相關(guān)。腎移植過程中各類藥物使用和多個系統(tǒng)狀態(tài)改變勢必對腸道菌群造成影響,從而可能導(dǎo)致相關(guān)疾病風(fēng)險增加。本研究通過觀察腎移植患者手術(shù)前后腸道菌群狀態(tài)改變,探索腎移植對患者腸道菌群的影響以及可能帶來的風(fēng)險。
方法:
第一部分:收集2015年9月至10月在解放軍309醫(yī)院行親屬腎移植的受者(7名)術(shù)前3天和術(shù)后第28天的糞便樣本,采用前后自身對照的設(shè)計
2、方案,基于16s rDNA高通量基因測序技術(shù)和silva數(shù)據(jù)庫對比分析腸道菌群結(jié)構(gòu)差異和豐度的變化,利用mothur、graphpad、R語言、LefSE等軟件進行腸道菌群多樣性和差異性分析。第二部分:進一步對服用磺胺類藥物的患者進行菌群結(jié)構(gòu)的分析。收集2016年6月至8月在我院行親屬腎移植的受者(10名)的糞便樣本,實驗方法同上,比較兩種不同狀態(tài)對腸道菌群的影響。
結(jié)果:
1、第一部分實驗中14例樣本共獲得有效序列
3、429535條,第二部分共20例樣本共獲得有效序列737730條,序列有效長度均在420-460bp,測序覆蓋率好,在97%的相似水平下分別共獲得276類和449類OUT。兩部分實驗所構(gòu)建的稀釋曲線和香農(nóng)曲線中所有樣本基本均隨著測序深度的增加趨向平坦,測序數(shù)據(jù)量足夠。
2、利用所測OTU、Ace、Chao、Shannon、Simpson等指數(shù)對腸到菌群的α多樣性進行評估發(fā)現(xiàn),第一部分實驗中的指標提示相較于術(shù)前,術(shù)后腸道菌群多樣
4、性呈下降趨勢但無統(tǒng)計學(xué)差異,而第二部分實驗中術(shù)后腸道菌群多樣性顯著下降,統(tǒng)計學(xué)差異明顯。
3、利用主坐標分析(PCoA)和相似度樹狀圖對腸道菌群的β多樣性進行評估, PCoA顯示第一部分實驗中手術(shù)前后兩組樣本存在部分相互混雜,不能區(qū)分。而第二部分實驗中手術(shù)前后兩組樣本少部分樣品重疊,但是分布可明顯區(qū)分開。相似度樹狀圖結(jié)果類似,兩部分實驗中兩組樣品總體趨勢為均在本組中實現(xiàn)聚類,再進一步與其他合并,但是第二部分實驗區(qū)分更為明顯。<
5、br> 4、兩部分實驗均呈現(xiàn)術(shù)后腸道菌群厚壁菌門相對豐度下降和變形菌門豐度上升的趨勢,均出現(xiàn)不同程度的腸道菌群紊亂,但在第二部分實驗中程度更深。LefSE分析用于比較組間腸道菌群差異性,第一部分實驗手術(shù)前后綱、目、科、屬水平均有差異,相對豐度下降的絕大部分屬于厚壁菌門內(nèi)毛螺旋菌科和胃瘤球菌科,相對豐度上升的僅有奇異菌屬。第二部分實驗,除了綱、目、科、屬水平差異,變形菌門相對豐度顯著上升,進一步細化發(fā)現(xiàn),除了厚壁菌門內(nèi)的毛螺旋菌科和胃瘤
6、球菌科內(nèi)細菌相對豐度進一步丟失,其他菌門內(nèi)部分細菌同樣受到影響,術(shù)后埃希氏菌屬、腸球菌屬成為絕對優(yōu)勢菌。
結(jié)論:
1、16S rDNA基因序列分析技術(shù)能夠測序腸道中所有微生物DNA序列,全面分析腸道微生物落的多樣性和豐度,滿足對腎移植患者腸道微生物群落的全面認識。
2、腎移植會損傷患者腸道菌群多樣性,長期服用磺胺類藥物會導(dǎo)致多樣性進一步丟失。
3、腎移植術(shù)后腸道內(nèi)優(yōu)勢共生菌群減少,機會致病菌增多,
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