利用16S rDNA序列分析鑒定油菜內生細菌研究.pdf

1、　　本試驗從健康油菜植株的不同組織器官中分離到大量內生細菌，這些細菌菌落形態(tài)存在明顯的差異，表明油菜組織中存在大量內生細菌，且類群豐富。分離獲得的122株內生細菌，根據菌落形態(tài)可以劃分為35類；利用細菌通用引物對16S核糖體DNA進行擴增，獲得約1.5kb片段，分別用內切酶HaeⅢ和MspⅠ對擴增產物進行限制性酶切，產生不同的酶切圖譜；根據酶切圖譜聚類分析結果，所有供試菌株被歸為39類，這一結果從遺傳上顯示油菜內生細菌類群的多樣性。兩種

2、方法獲得的歸類結果經過比較，發(fā)現菌落特征所反映的信息量是有限的，只能作為初步的參考指標，核糖體DNA的限制性片段長度多態(tài)性分析快速、準確，可以作為油菜內塵細菌多樣性分析的一種有效方法?！　⊥ㄟ^平板對峙培養(yǎng)法測定122株內生細菌對十字花科黑斑病菌、油菜菌核病菌等10種植物病原真菌的抑菌作用，結果表明有22株內生細菌對一種以上的病原菌具有抑菌作用，其中5株(G5、BS5、B5、J6、LT20)抑菌譜廣，抑菌作用明顯；進一步測定了這5株內生

3、細菌的無菌濾液對10種病原真菌的抑菌率，結果發(fā)現，這5株拮抗菌的發(fā)酵液對病原真菌均有不同程度的抑菌效果。本研究顯示從油菜內生細菌中可篩選到拮抗作用好的菌株，并且內生細菌可產生具有抑菌活性的代謝物，可以作為對多種植物病原真菌具有抑菌活性物質的篩選資源。通過16SrDNA序列系統發(fā)育分析，5個菌株分別被鑒定為蠟狀芽孢桿菌、乙酸不動桿菌、成團腸桿菌、惡臭假單胞桿菌、成團泛菌屬，作為內生細菌存在于油菜體內屬首次報道?！　⊥ㄟ^16SrDNA序列

4、系統發(fā)育分析對PCR-RFLP劃分的主要類群進行了鑒定，共鑒定出內生細菌16種，分別是，分別為：蠟狀芽孢桿菌、泡狀枝動菌、醋酸鈣不動桿菌、鮑氏不動桿菌、產吲哚金黃桿菌、燕麥食酸菌；菠蘿泛菌、成團泛菌、分散泛菌以及泛菌屬的2個未知種、腸桿菌屬的、多食鞘氨醇桿菌、惡臭假單胞菌、黃褐假單胞菌、類黃褐假單胞菌以及假單孢菌屬2個種。這一結果表明油菜內生細菌的種類非常豐富。它們都是首次在油菜中發(fā)現。其中類黃褐假單胞菌、腸桿菌屬、菠蘿泛菌、分散泛菌、