霍亂弧菌O139和E1 Tor型菌株16s rDNA及16s～23s rDNA間隔區(qū)序列研究.pdf

1、1993年在中國(guó)的新疆省柯坪縣首次出現(xiàn)了O139群霍亂弧菌引起的霍亂爆發(fā).該實(shí)驗(yàn)用16s rDNA指紋圖譜、16s rDNA克隆子質(zhì)粒圖譜、16s rDNA及16s~23s rDNA間隔區(qū)序列分析法對(duì)來(lái)自新疆的O139群霍亂弧菌(XJ93006)、El Tor型霍亂弧菌(XJ89079)及印度分離的O139群霍亂弧菌(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株MO45)進(jìn)行研究,分析三者之間的遺傳關(guān)系,探討中國(guó)新疆省O139霍亂弧菌的來(lái)源,為霍亂的防治措施提供依據(jù).結(jié)

2、論1.PCR摻入法制備16s rDNA及VC0309探針,方法簡(jiǎn)便,探針產(chǎn)量高,無(wú)需提純,可直接用于雜交.2.應(yīng)用16s rDNA指紋圖譜的方法比較菌株之間的差異,重復(fù)性好,分辨力高.三株霍亂弧菌的指紋圖譜具有很大的相似性,說(shuō)明O139菌與El Tor菌有緊密的遺傳關(guān)系.但是三者之間又存在差異,提示遺傳和環(huán)境因素在O139霍亂弧菌的演化中都有可能起到一定作用.3.該研究以多拷貝基因的上游序列為探針可以鎖定出某一拷貝的位置,從而把這一拷貝

3、克隆出來(lái),進(jìn)行專門分析,這種方法避免了多拷貝之間互相影響的問(wèn)題.三株霍亂弧菌陽(yáng)性克隆子pN16s23s45、pN16s23s79、pN16s23s06的質(zhì)粒圖譜在所選中的酶切位點(diǎn)上未見(jiàn)明顯差異,表明所選的外源片段在三株霍亂弧菌中是相當(dāng)保守的,三株霍亂弧菌具有緊密的遺傳關(guān)系.通過(guò)測(cè)序比較三者序列上的差異可以更精細(xì)的分析三者之間的遺傳關(guān)系.4.該研究以含有第三個(gè)拷貝16s rDNA、16s~23s rDNA間隔區(qū)的陽(yáng)性克隆pN16s23s4

4、5、pN16s23s79、pN16s23s06作為模板可以單一的擴(kuò)增出第三個(gè)拷貝16s rDNA及16s~23s rDNA間隔區(qū)序列,這種方法增強(qiáng)了三者的可比性,便于結(jié)果的分析.5.三株霍亂弧菌16s rDNA基因和16s~23s rDNA間隔區(qū)序列同源性比較顯示XJ93006株與MO45株的親緣關(guān)系近于XJ93006株與XJ89079株.提示中國(guó)新疆的XJ93006菌株與國(guó)外的MO45菌株具有更緊密的遺傳關(guān)系.6.霍亂弧菌的演變與菌株