16S rDNA T-RFLP快速分析慢性腹瀉患者腸道菌群及其應(yīng)用研究.pdf

1、 本研究篩選出一對(duì)通用引物，再配合使用毛細(xì)管電泳技術(shù)應(yīng)用于腸道菌群檢測(cè)，目的是使一次實(shí)驗(yàn)在一個(gè)混合樣品中能同時(shí)檢測(cè)出多種細(xì)菌，有助于快速分析腸道復(fù)雜菌群的結(jié)構(gòu)。方法是其中一個(gè)引物5'末端用6-FAM進(jìn)行熒光標(biāo)記，而另一個(gè)引物不進(jìn)行標(biāo)記。　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用該法對(duì)30例慢性腹瀉患者和22例健康人進(jìn)行腸道菌群分析，從而探討菌群變化情況。經(jīng)過(guò)分析后發(fā)現(xiàn)，健康人腸道菌群中以厭氧菌為主，這與20世紀(jì)60年代中期以前的說(shuō)法不同，當(dāng)時(shí)由于厭氧菌技

2、術(shù)不完善，過(guò)去被認(rèn)為是主要優(yōu)勢(shì)菌的大腸桿菌，在實(shí)際上為少數(shù)，居于次要地位。結(jié)腸內(nèi)寄生的優(yōu)勢(shì)菌種均能夠同時(shí)被檢測(cè)出來(lái)。該法能夠?qū)θ梭w腸道菌群進(jìn)行定性和定量分析，30例慢性腹瀉患者均未發(fā)現(xiàn)特異的病原菌，而優(yōu)勢(shì)菌群的種類和比例均發(fā)生了改變，提示發(fā)生了腸道菌群紊亂。因此我們建議對(duì)不明原因的腹瀉要及時(shí)對(duì)腸道菌群進(jìn)行監(jiān)測(cè)，動(dòng)態(tài)觀察，避免抗生素的盲目使用，有效避免耐藥菌株的產(chǎn)生。 本文證實(shí)：利用16SrDNA基因建立的末端限制性酶切片段長(zhǎng)度多