牧草內(nèi)生枯草芽孢桿菌的功能多樣性及其16S rDNA鑒定.pdf

1、植物內(nèi)生細(xì)菌（Endophytic bacteria）是指定殖在植物組織內(nèi)部但不引起明顯病害癥狀的細(xì)菌。本研究應(yīng)用傳統(tǒng)微生物學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的研究方法，測定了4株內(nèi)生枯草芽孢桿菌的促生、抑菌、固氮、溶磷、分泌生長素和分解纖維素等功能，研究了它們的主要生理特性，并利用16S rDNA技術(shù)對其進(jìn)行了鑒定，主要結(jié)果如下：
　　 1.內(nèi)生枯草芽孢桿菌生物學(xué)功能測定
　　 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）XA

2、7、XB3、ZA14和ZHC11菌株對大麥、茄子和番茄種子浸種處理后發(fā)芽率顯著（顯著水平F<0.01）高于對照，表明內(nèi)生芽孢桿菌具有促進(jìn)種子發(fā)芽的作用；對峙實(shí)驗結(jié)果表明，4株菌對9種植物病原真菌均有抑制作用，如XB3對9種病原真菌的抑制率也各不相同，最大為32.3％，最小為15.6％；通過各菌株處理馬鈴薯干腐病菌菌絲和番茄早疫病菌菌絲72 h后，顯微觀察結(jié)果顯示，各病菌菌絲出現(xiàn)膨大、扭曲現(xiàn)象，菌絲內(nèi)的原生質(zhì)發(fā)生凝集，菌絲頂端和中部出現(xiàn)泡

3、狀物且破裂，表明內(nèi)生芽孢桿菌對測定的2種植物病原真菌具有致畸和破壞作用；4株菌具有分泌IAA能力，在不加色氨酸和加色氨酸的King培養(yǎng)基中，均為ZA14分泌IAA的濃度最高，其值分別為36.80μg/mL和25.74μg/mL，XA7最低，其值分別為1.58μg/mL和為3.84μg/mL；經(jīng)過三代培養(yǎng)，4株菌均能在阿須貝培養(yǎng)基內(nèi)明顯生長，均具有固氮能力；4菌株在Pko平板培養(yǎng)基上形成溶磷圈，說明具有溶解[Ca3（PO4）2]的能力，但

4、其溶磷能力較弱且差異不顯著；4株菌在不同程度上具有分解纖維素的能力，從菌落周圍形成的透明圈情況看，XB3的分解能力最強(qiáng)，其次是XA7、ZA14、ZHC11。
　　 2.內(nèi)生枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)特性
　　 枯草芽孢桿菌（Bacillus subglis）zA14、XA7、ZHC11和XB3分別在36h、48、60和72h生長量達(dá)到最大值；菌株.ZHC11在偏酸條件下（pH5）生長旺盛，菌株XA7、XB3和ZA14在pH6-8

5、之間菌體生長旺盛，可見，不同內(nèi)生枯草芽孢桿菌對酸堿的適應(yīng)性有所不同；當(dāng)NaCl濃度在0-7％之間時，各供試菌株均能生長，當(dāng)NaCl濃度大于7％時，菌株XA7、ZHC11和XB3生長非常緩慢或停止生長，其中ZA14在NaCl濃度為9％時生長量（OD600）為0.148，說明ZA14具有較高的耐鹽性。
　　 3.內(nèi)生枯草芽孢桿菌的16S rDNA鑒定
　　 供試菌株在牛肉膏蛋白胨平板培養(yǎng)基和NB液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)特征不同，革蘭