自體骨髓干細胞動員聯(lián)合辛伐他汀治療腦出血的實驗研究.pdf

1、　　目的：研究自體骨髓干細胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)動員聯(lián)合辛伐他汀治療腦出血的療效和機制。
　　方法：選用清潔級雄性SD大鼠,建模前所有動物腹腔注射 5-溴2-脫氧尿嘧啶核苷 (Bromodeoxyuridine, Brdu) 50mg/kg/d33 天。應用立體定位向尾狀核注入自體血制備腦出血動物模型,腦出血后 24h將大鼠隨機分為4組：自體BMSCs動員聯(lián)合辛伐他汀治療組、自

2、體BMSCs動員治療組、辛伐他汀治療組和 PBS對照組。即 BMSCs 動員治療組經腹腔注射 rhG-CSF (50ug/kg/d)；辛伐他汀治療組給予口服辛伐他汀2mg/kg/d；自體BMSCs動員聯(lián)合辛伐他汀組在BMSCs動員治療組基礎上給予口服辛伐他汀 2mg/kg/d；PBS 對照組給予 PBS,各組動物均連續(xù)給藥7d。于術后24h、7d、14d、21d、28d采用改良神經功能缺損程度評分(modified neurologic

3、al severity score, mNSS )和轉角試驗( cornering test )檢測大鼠神經行為學變化,HE染色觀察出血周圍組織病理變化,電鏡觀察超微結構改變情況,免疫熒光雙染檢測 BrdU / NSE 雙陽性表達細胞數,免疫組織化學檢測Ⅷ因子表達情況,TUNEL檢測細胞凋亡。實驗數據采用均數±標準差( x±s )表示,采用SPSS 13.0軟件包進行統(tǒng)計分析,重復測量數據采用單個重復測量因素的方差分析,各組之間比較采用

4、多個樣本均數兩兩比較(LSD法),P<0.05為差異有顯著性意義。
　　結果：1. 神經行為學檢查 腦出血后24小時各組mNSS評分、轉角測試評分無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)。隨時間的延長,各組mNSS評分逐漸下降,治療組1w時mNSS評分下降幅度較大,向右轉身次數減少,聯(lián)合組最為顯著。腦出血后 1w、2w、3w、4w各治療組mNSS明顯低于對照組(P<0.05)。
　　2. 組織病理變化 血腫、組織水腫及缺血面

5、積1w時開始減少,其消散程度由快到慢順序依次為：聯(lián)合組,動員組,辛伐他汀組,對照組。
　　3. 血腫周圍超微結構變化 出血后 1w,治療組線粒體腫脹程度減輕,破壞的突觸結構逐漸恢復正常,對照組仍有嚴重的超微結構破壞。
　　4. 免疫熒光 BrdU/NSE免疫熒光雙染顯示,腦出血后24小時血腫周圍可依稀出現BrdU/NSE共表達(黃色熒光),隨時間延長,雙標陽性細胞逐漸增多,至2w時達高峰,隨后呈遞減趨勢。2w時聯(lián)合組

6、免疫熒光雙標陽性細胞數顯著高于辛伐他汀治療組(P<0.05)和自體BMSCs動員組P<0.05)。
　　5. 免疫組織化學檢測 2w時聯(lián)合組微血管計數顯著增多,明顯高于對照組(P<0.05),自體BMSCs動員組、辛伐他汀組均明顯高于對照組 (P均<0.05)。
　　6. TUNEL 檢測細胞凋亡 各組血腫周圍細胞凋亡數于腦出血后 24h 達高峰,隨時間延長呈逐漸下降趨勢。2w時,聯(lián)合組明顯低于其他三組(P均<0.0

7、5),后兩組均明顯低于對照組 (P均<0.05)。
　　結論：1. 自體BMSCs動員、辛伐他汀單獨應用均具有神經保護作用,促進腦出血大鼠神經功能恢復,二者聯(lián)合應用起協(xié)同相加作用,效果更明顯。
　　2. 自體BMSCs動員、辛伐他汀單獨應用均減輕腦出血后病理損害,促進超微結構的恢復,二者聯(lián)合應用作用更顯著。
　　3. 自體BMSCs動員聯(lián)合應用辛伐他汀增強協(xié)同促進神經再生、血管再生。
　　4. 自