自體骨髓干細(xì)胞移植治療肝功能不全臨床觀察.pdf

1、研究背景： 肝臟疾患是影響人類生活質(zhì)量和生命健康的重要疾病之一，這些疾病都將逐漸發(fā)展，演變?yōu)楦卫w維化或肝硬化，最終出現(xiàn)肝臟功能衰竭。對(duì)于各種類型的終末期肝病，肝移植在理論上應(yīng)該為最理想的治療選擇。但由于供體缺乏及保存供體的時(shí)間限制的原因，很多病人在等待肝移植的過程中即死亡。 生物人工肝系統(tǒng)能使終末期肝病病人橋接肝移植。肝細(xì)胞具有強(qiáng)大的再生能力，臨時(shí)應(yīng)用生物人工肝系統(tǒng)也可以解決急性肝功能的失代償，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，肝功能可以

2、暫時(shí)恢復(fù)，爭(zhēng)取到等待肝移植的時(shí)間。經(jīng)過幾十年的研究，生物人工肝系統(tǒng)巳從非生物型、生物型人工肝系統(tǒng)發(fā)展到混合型人工肝系統(tǒng)，國(guó)內(nèi)外已經(jīng)有不少種類的人工肝系統(tǒng)應(yīng)用于臨床。但如何獲得高質(zhì)量、來源豐富的生物人工肝用肝細(xì)胞是當(dāng)前面臨的最大問題。 由于肝臟移植的供體短缺、術(shù)后的免疫排斥以及昂貴的治療費(fèi)用等問題嚴(yán)重制約了肝臟移植的廣泛應(yīng)用；生物人工肝由于肝細(xì)胞來源局限以及生物安全性等因素而受到限制。尋求一種相對(duì)簡(jiǎn)便、安全有效、費(fèi)用低廉的替代治療

3、方案成為臨床迫切需要解決的問題。目前干細(xì)胞移植成為研究的熱點(diǎn)，由于終末期肝病患者自身肝細(xì)胞已極度破壞，僅存的肝細(xì)胞不能維持自身的生理功能從而需要臨床治療。而同種異體和異種肝細(xì)胞移植由于受免疫排斥、動(dòng)物源性傳染病、倫理等方面的制約而不能應(yīng)用于臨床。目前干細(xì)胞的研究已在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域取得令人矚目的成就，也為廣大臨床工作者開拓了新的思路，利用細(xì)胞移植治療肝病成為新的熱點(diǎn)，但基礎(chǔ)研究的報(bào)道很多，臨床研究?jī)H北京等極少數(shù)地區(qū)報(bào)道有成功病例。干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)為

4、解決肝細(xì)胞源短缺的問題提供了很好的思路。1999年以來國(guó)外學(xué)者相繼提出：骨髓干細(xì)胞能夠在鼠肝內(nèi)轉(zhuǎn)化為肝卵圓細(xì)胞甚至成熟的肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞。Verfaillie等研究表明從大鼠、小鼠和人的骨髓中分離得到多能成年祖細(xì)胞(multi-potent adult progenitor cells，M A P C s)，該細(xì)胞體外經(jīng)F G F4和H G F誘導(dǎo)可分化為功能肝細(xì)胞，此細(xì)胞能合成尿素、白蛋白、糖原，具有細(xì)胞色素P 450活性，能吸附α低

5、密度脂蛋白。將這一亞群細(xì)胞移植至肝臟，用綠色熒光蛋白和白蛋白雙標(biāo)技術(shù)可證實(shí)其已經(jīng)分化為功能完備的肝細(xì)胞。以色列的科學(xué)家發(fā)現(xiàn)：當(dāng)肝臟遇到損害時(shí)，它會(huì)產(chǎn)生大量的信號(hào)分子來誘導(dǎo)骨髓干細(xì)胞轉(zhuǎn)移和分化，修復(fù)受到損害的肝臟細(xì)胞。 總結(jié)國(guó)內(nèi)外的大量基礎(chǔ)研究可以證實(shí)：骨髓中存在內(nèi)分化為肝細(xì)胞的干細(xì)胞，將骨髓中的干細(xì)胞移植到肝臟后在肝臟特定的微環(huán)境內(nèi)可橫向分化成有功能的肝細(xì)胞。我們的前期研究亦證實(shí)：體內(nèi)、體外骨髓干細(xì)胞均可橫向分化為有生物學(xué)功能的

6、肝細(xì)胞，稱為可塑性，結(jié)合國(guó)內(nèi)外的研究成果我們總結(jié)出自體骨髓干細(xì)胞在組織再生方面具有特定的優(yōu)勢(shì)：①完全是自身的遺傳背景，不受細(xì)胞來源和移植免疫或排斥的限制；②成人組織干細(xì)胞的分化潛能相對(duì)比較局限，更容易誘導(dǎo)向特定的組織細(xì)胞分化，也可直接用于體內(nèi)組織的原位修復(fù)；③無倫理學(xué)方面的困擾，更易于臨床應(yīng)用。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者亦開始自體骨髓干細(xì)胞移植的研究，其中骨髓干細(xì)胞移植治療心肌梗死及神經(jīng)系統(tǒng)疾病亦屢見成功報(bào)道，肝病治療方面北京軍區(qū)總醫(yī)院報(bào)道經(jīng)肝動(dòng)脈

7、骨髓干細(xì)胞移植治療肝硬化20例，其中14例有效、6例無效。 本研究在課題組前期理論研究及動(dòng)物體外、體內(nèi)研究的基礎(chǔ)上，嚴(yán)格選擇臨床適應(yīng)病例，術(shù)后監(jiān)測(cè)生化指標(biāo)及觀察臨床癥狀判斷治療效果，為臨床大規(guī)模開展自體骨髓干細(xì)胞移植奠定基礎(chǔ)。第一章人骨髓干細(xì)胞的分離目的：建立簡(jiǎn)便安全的自體骨髓干細(xì)胞分離方法，同時(shí)檢驗(yàn)分離所得細(xì)胞的存活率、有無細(xì)菌感染等。 方法：應(yīng)用密度梯度離心法分離人骨髓干細(xì)胞，臺(tái)盼蘭染色檢驗(yàn)細(xì)胞的存活率，實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)

8、檢驗(yàn)判斷有無細(xì)菌感染。 結(jié)果：密度梯度離心法能分離出純度較高的HMSCs，臺(tái)盼蘭染色顯示細(xì)胞存活率在95％以上，細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)無細(xì)菌感染。 結(jié)論：應(yīng)用密度梯度離心法可得到純度較高的HMSCs，細(xì)胞存活率在95％以上且無細(xì)菌感染。 第二章自體骨髓干細(xì)胞移植治療肝功能不全的臨床研究。目的：探索自體骨髓干細(xì)胞移植對(duì)肝功能不全患者的治療效果，為干細(xì)胞移植的臨床大規(guī)模開展提供基礎(chǔ)。 方法：我們選擇了6例肝功能不全患者均

9、來源于我所住院患者，年齡在44～69歲；患者在無菌條件下，從骼后上棘抽取骨髓50 ml，分離純化骨髓干細(xì)胞。在局部麻醉下，行肝動(dòng)脈介入將分離的骨髓干細(xì)胞移植于肝臟；患者在移植后不同時(shí)間，1周、2周、4周、8周、12周進(jìn)行肝功能檢測(cè)；觀察在移植后不同時(shí)間癥狀改善情況及術(shù)后的不良反應(yīng)情況。 結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)在移植12周后，我們觀察了患者在干細(xì)胞移植前后不同時(shí)間肝功能的變化，發(fā)現(xiàn)患者在移植1周，2周，4周，8周，12周后，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(A

10、LT)逐漸降低，由平均98.4 IU/L降至41.5 IU/L；總膽紅素(TB IL)由平均136.5mol/L降至78.4 mol/L；肌酐由112.3降至72.1；白蛋白(ALB)逐漸升高，由平均23.3 g/L升至32.6 g/L；凝血酶原時(shí)間(PT)下降不明顯。我們進(jìn)一步觀察了自體骨髓干細(xì)胞移植后患者的生存情況發(fā)現(xiàn)，患者在移植12周生存率為100％；1例在7個(gè)月后死亡。我們觀察了在自體骨髓干細(xì)胞移植后患者癥狀的變化，發(fā)現(xiàn)移植后大