犬自體骨髓干細胞移植修復受損心肌的實驗研究.pdf

1、該研究就是通過為急性心梗模型犬移植自體骨髓間質干細胞以觀察這種治療方法的療效.整個研究分以下四個部分.第一部分:犬自體骨髓干細胞的體外分離、增殖、分化和鑒定目的:驗證骨髓間質干細胞在體外能否分化為包括心肌細胞在內(nèi)的其他多種細胞.實驗方法:抽取犬骨髓液10mL,應用DMEM以1:1稀釋骨髓液,用1.063g/ml percoll密度分離液,以600g離心力,30分鐘分離骨髓單核細胞;以LG-DMEM及10﹪FBS添加100 U/ml pe

2、nicillin,100 μg/ml streptomycin,and 25μg/ml amphotericin B培養(yǎng)骨髓干細胞;利用細胞貼壁篩選法分離培養(yǎng)、擴增骨髓間葉干細胞;應用干細胞表面標志蛋白檢測,誘導劑誘導分化間葉組織細胞等方法進行犬骨髓間葉干細胞的鑒定.結論:密度梯度分離法與貼壁篩選法能夠較好進行犬骨髓間葉干細胞的體外分離、培養(yǎng)與擴增,分離培養(yǎng)的細胞具備骨髓間葉干細胞的特性,并可以定向分化為心肌細胞、脂肪細胞、成骨細胞等多

3、種間葉組織類型細胞.第二部分:犬急性心肌梗死模型的制備和評價以及經(jīng)冠狀動脈移植骨髓干細胞目的:制備急性心肌梗死模型犬,并進行臨床評價.同時經(jīng)冠狀動脈(冠脈)進行骨髓干細胞移植.第三部分:在體移植療效臨床評價目的:評價實驗動物在飼養(yǎng)8~10周后的存活率、心功能及心肌代謝顯像.方法:模型動物在接受移植后飼養(yǎng)8~10周,再次麻醉,對其進行第二次臨床檢測,包括:超聲心動圖(UCG)、Tc99m靜息心肌灌注顯像(Tc99m-MIBI)和18FDG

4、-心肌代謝顯像(18FDG-PET).結論:自體骨髓干細胞移植確可顯著降低急性心梗犬的死亡率,改善心功能,提高左室射血分數(shù),改善梗死區(qū)的血流灌注,這些效應可能得益于移植的干細胞在宿主梗死區(qū)內(nèi)得到了增殖和分化.第四部分:組織病理學研究目的:通過免疫組化研究,找到移植細胞在宿主體內(nèi)得到增殖、分化的細胞學證據(jù),并對移植療效的機制提供細胞水平的解釋.結論:骨髓干細胞在梗死區(qū)部分分化為內(nèi)皮細胞,形成大量的新生毛細血管,參與梗死區(qū)供血的改善.部分分