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文檔簡介
1、垂體腺瘤約占顱內腫瘤的10%~15%,盡管它是良性腫瘤,但是仍然可以導致臨床癥狀。占位效應可以導致頭痛、視力下降;功能性垂體腺瘤可以引起激素分泌失調,能導致情緒障礙、性功能障礙、不育、肥胖、高血壓、糖尿病,加速心臟疾病惡化;殘余的距常垂體組織受壓會出現(xiàn)垂體功能低下。垂體腺瘤的發(fā)生發(fā)展涉及諸多因素:基因突變與失活、下丘腦激素、生長因子、細胞因子等。垂體腺瘤中可見基因突變、缺失、重組,而異常甲基化致腫瘤抑制基因沉默也是垂體腺瘤發(fā)生的一個重要
2、機制。越來越多的證據(jù)表明垂體腺瘤是單克隆發(fā)生并且伴隨基因改變,然而我們對于垂體瘤發(fā)生發(fā)展伴隨的基因改變仍然所知甚少。
為了研究垂體瘤發(fā)生發(fā)展機制,本課題組前期使用Affymetrix公司U133 Plus2.0基因芯片研究人侵襲性、非侵襲性垂體瘤和人正常垂體之間的基因表達差異,發(fā)現(xiàn)一系列下調基因,其中包括DLC-1。1998年,Yuan等在對多個肝癌細胞系的8號染色體的研究中,用再現(xiàn)差異分析法(RDA),發(fā)現(xiàn)一種重要抑癌基
3、因DLC-1?,F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在許多原發(fā)腫瘤和細胞系中DLC-1均出現(xiàn)低表達或表達缺失,但在人體各正常組織中均表達;在多種原發(fā)腫瘤和細胞系中還發(fā)現(xiàn)了DLC-1基因發(fā)生啟動子甲基化。DLC-1含有三個結構域:RhoGAP、SAM和START。研究表明DLC-1能調節(jié)細胞骨架形成和形態(tài)改變,影響細胞轉錄、增殖、遷移和凋亡。
為探討DLC-1基因在垂體腺瘤發(fā)生發(fā)展中的作用,本課題探討了垂體腺瘤中DLC-1不同轉錄本mRNA的表達、蛋白表
4、達與垂體腺瘤侵襲性的關系,并對DLC-1啟動子甲基化進行了研究;初步探討DLC-1基因在垂體腺瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的作用。本論文從以下三個方面進行了研究:1.人垂體腺瘤中DLC-1不同轉錄本mRNA的表達和垂體腺瘤侵襲性關系的實驗研究;2.人垂體腺瘤中DLC-1的蛋白表達和垂體腺瘤臨床病理相關性分析的實驗研究;3.人垂體腺瘤中DLC-1啟動子甲基化狀態(tài)的研究。
第一部分人垂體腺瘤中DLC-1不同轉錄本mRNA的表達和垂體
5、腺瘤侵襲性關系的實驗研究
目的:明確DLC-1三個不同轉錄本mRNA在正常垂體和各類型垂體腺瘤組織中的表達情況及其同垂體腺瘤侵襲性的關系。
方法:設計各轉錄本特異性引物,運用熒光定量聚合酶鏈反應技術,檢測DLC-1不同轉錄本mRNA在正常垂體和各類型垂體腺瘤組織中的表達。垂體腺瘤標本按臨床表現(xiàn)和磁共振特征分為侵襲組和非侵襲組,按臨床表現(xiàn)和免疫組化分為功能性腺瘤組和無功能腺瘤組。分析不同轉錄本在各組表現(xiàn)情況。<
6、br> 結果:1.DLC-1轉錄本一、二在正常垂體及垂體腺瘤中均有表達;未見有第三轉錄本表達。2.正常垂體中DLC-1轉錄本一、二的mRNA表達水平顯著高于垂體腺瘤組(P<0.01);侵襲組中DLC-1轉錄本一、二的mRNA表達水平顯著低于非侵襲組(P<0.01),功能性腺瘤組與無功能腺瘤組表達量無顯著差異(P>0.05)。
結論:DLC-1轉錄本一、二在正常垂體及垂體腺瘤中均有表達,與垂體腺瘤侵襲性關系密切;未見有
7、第三轉錄本表達。
第二部分人垂體腺瘤中DLC-1的蛋白表達和垂體腺瘤臨床病理相關性分析的實驗研究
目的:明確DLC-1、Ki-67蛋白在各類型垂體腺瘤組織及正常垂體中的表達及其同垂體腺瘤臨床病理的關系,探討DLC-1和Ki-67的相關性。
方法:垂體腺瘤標本按臨床表現(xiàn)和磁共振特征分為侵襲組和非侵襲組,按臨床和免疫組化分為功能性腺瘤組和無功能腺瘤組。運用免疫組化技術觀察DLC-1和Ki-67蛋白的
8、細胞表達定位,以及在不同組別的表達差異,討論二者表達的相關性;運用western-blot方法檢測標本中DLC-1的蛋白表達,觀察其與垂體腺瘤侵襲性關系。
結果:1.DLC-1蛋白表達定位于垂體腺瘤及正常垂體細胞漿;Ki-67蛋白主要表達于細胞核。2.正常垂體中DLC-1蛋白表達水平顯著高于垂體腺瘤組(P<0.01);侵襲組中DLC-1蛋白表達水平顯著低于非侵襲組(P<0.01),功能性腺瘤組和無功能腺瘤組無明顯差異(P>
9、0.05);3.垂體腺瘤中Ki-67蛋白表達水平顯著高于正常垂體組(P<0.01);侵襲組Ki-67蛋白表達水平顯著高于非侵襲組(P<0.01),功能性腺瘤組和無功能腺瘤組無顯著差異(P>0.05);4.垂體腺瘤中DLC-1和Ki-67的蛋白表達有負相關性(r=-0.764,P<0.01)。
結論:DLC-1表達下調可能和垂體腺瘤的發(fā)生、侵襲性及增殖能力改變有關。
第三部分人垂體腺瘤中DLC-1啟動子甲基化狀
10、態(tài)的研究
目的:明確人垂體腺瘤中DLC-1低表達是否由于基因啟動子甲基化引起。
方法:設計DLC-1基因甲基化、非甲基化引物,運用MSP(methylation-specificPCR,甲基化特異性PCR)方法檢測人垂體腺瘤細胞中DLC-1啟動子甲基化狀態(tài)。
結果:所有垂體腺瘤標本非甲基化引物都能擴增,而僅有2例(2/15)標本甲基化引物能擴增:甲基化、非甲基化引物擴增產(chǎn)物的克隆測序結果進一步驗
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