阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒對(duì)口腔鱗癌作用的初步研究.pdf

1、[目的]制備阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒并探索其于體外靶向殺傷口腔鱗癌細(xì)胞的作用及其經(jīng)裸鼠瘤體給藥后，口腔鱗癌病灶及易損器官的藥物分布，確定阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒治療口腔鱗癌的靶向性。 [方法]本研究分為三部分：實(shí)驗(yàn)一利用碳化二亞胺作為交聯(lián)劑，共價(jià)連接脫氧膽酸到透明質(zhì)酸上制備透明質(zhì)酸-脫氧膽酸耦合物，通過(guò)超聲法制備納米粒，利用透射電子顯微鏡觀測(cè)納米粒的形態(tài)和粒徑的分布。利用納米粒內(nèi)部疏水相互作用，把阿霉素裝載進(jìn)入納米粒的疏水內(nèi)核中

2、，制備阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒，利用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)不同載藥量阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒體外釋藥性能。實(shí)驗(yàn)二在體外培養(yǎng)的口腔鱗癌細(xì)胞中分別加入阿霉素濃度為0.5、1.0、5.0、10.0mg/L的阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒，作用24、48h后利用倒置顯微鏡檢測(cè)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化，利用MTT檢測(cè)阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向殺傷作用，濃度為5.0、10.0mg/L時(shí)分別作用6、12、24、48h，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)阿霉素-

3、透明質(zhì)酸納米顆粒對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡作用。實(shí)驗(yàn)三將36只口腔鱗癌裸鼠隨機(jī)分為阿霉素組和阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒組，分別將阿霉素濃度為1.0、10.0mg/L的兩組藥物按劑量1mg/kg通過(guò)瘤體給藥，每組設(shè)三個(gè)平行組。每組給藥1、5、15h后處死裸鼠，取瘤體外正常組織、瘤體、心、肝、脾、腎組織各1.0g，用高效液相色譜法檢測(cè)組織內(nèi)的藥物濃度，對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。 [結(jié)果]第一部分電鏡觀測(cè)顯示自聚集體的外表近似球形，形態(tài)完整具有很窄的

4、粒徑分布。在前5個(gè)小時(shí)內(nèi)，不同載藥量的納米粒突釋效應(yīng)比較顯著，后面部分的釋放曲線則比較平緩，緩釋效應(yīng)突出。第二部分阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒組癌細(xì)胞出現(xiàn)膜小泡、凋亡小體等細(xì)胞凋亡的特征性改變；MTT試驗(yàn)顯示阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用優(yōu)于游離阿霉素(p<0.01)；流式細(xì)胞術(shù)示相同濃度阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒細(xì)胞凋亡百分率隨時(shí)間增加而升高(P<0.01)，相同作用時(shí)間凋亡率隨濃度增加而升高(p<0.05)。第三部分作用1、

5、5、15h，肝、心、脾、肺中阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒組阿霉素含量均低于游離阿霉素(P<0.01)，而瘤體組織中阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒含量高于游離阿霉素(P<0.01)。 [結(jié)論]1.阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒中阿霉素的釋放顯著依賴于納米球的載藥量，載藥量越高，藥物釋放的越緩慢。2.阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒可特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞，并實(shí)現(xiàn)其殺傷作用，并隨時(shí)間延長(zhǎng)殺傷作用增加。3.阿霉素-透明質(zhì)酸納米顆粒對(duì)口腔鱗癌具有靶向作用，可降低阿