雌激素受體共調(diào)節(jié)因子GA5的生物學(xué)功能研究.pdf

1、目的：為研究雌激素受體共調(diào)節(jié)因子GA5在乳腺癌細(xì)胞中的作用及其分子機(jī)制。方法：運(yùn)用免疫共沉淀方法驗(yàn)證GA5與ERβ在細(xì)胞內(nèi)的相互作用，運(yùn)用westernblot檢測(cè)不同乳腺癌細(xì)胞中及人乳腺癌組織中GA5的表達(dá)；以人乳腺癌文庫(kù)為模板，運(yùn)用PCR技術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)、慢病毒包裝等技術(shù)構(gòu)建了pCDH-GA5質(zhì)粒，在此基礎(chǔ)上建立GA5過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞系，運(yùn)用免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察GA5在細(xì)胞內(nèi)的定位；建立GA5敲低乳腺癌細(xì)胞系，并運(yùn)用RT-PCR技術(shù)、we

2、stern blot等技術(shù)檢測(cè)其敲低效果；運(yùn)用生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂實(shí)驗(yàn)以及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察GA5對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　結(jié)果：驗(yàn)證了GA5與ERβ在細(xì)胞內(nèi)相互結(jié)合，GA5在不同乳腺癌細(xì)胞系中普遍表達(dá)，在人乳腺癌組織中表達(dá)低于癌旁組織；構(gòu)建了pCDH-GA5表達(dá)載體，并建立了GA5過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞系，證實(shí)GA5定位于細(xì)胞核；建立GA5敲低乳腺癌細(xì)胞系；實(shí)驗(yàn)證實(shí)GA5能抑制乳腺癌細(xì)胞的錨定依賴性生長(zhǎng)、非錨定依賴性生長(zhǎng)以及平板