雌激素受體共調(diào)節(jié)因子GA5的生物學功能研究.pdf

1、目的：為研究雌激素受體共調(diào)節(jié)因子GA5在乳腺癌細胞中的作用及其分子機制。方法：運用免疫共沉淀方法驗證GA5與ERβ在細胞內(nèi)的相互作用，運用westernblot檢測不同乳腺癌細胞中及人乳腺癌組織中GA5的表達；以人乳腺癌文庫為模板，運用PCR技術、細胞培養(yǎng)、慢病毒包裝等技術構(gòu)建了pCDH-GA5質(zhì)粒，在此基礎上建立GA5過表達乳腺癌細胞系，運用免疫熒光實驗觀察GA5在細胞內(nèi)的定位；建立GA5敲低乳腺癌細胞系，并運用RT-PCR技術、we

2、stern blot等技術檢測其敲低效果；運用生長曲線實驗、軟瓊脂實驗以及平板克隆形成實驗觀察GA5對乳腺癌細胞生長的影響。
　　結(jié)果：驗證了GA5與ERβ在細胞內(nèi)相互結(jié)合，GA5在不同乳腺癌細胞系中普遍表達，在人乳腺癌組織中表達低于癌旁組織；構(gòu)建了pCDH-GA5表達載體，并建立了GA5過表達乳腺癌細胞系，證實GA5定位于細胞核；建立GA5敲低乳腺癌細胞系；實驗證實GA5能抑制乳腺癌細胞的錨定依賴性生長、非錨定依賴性生長以及平板