冠心病合并高血壓1號染色體高密度掃描易感基因關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、目的:冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary artery disease，CAD)是一種由環(huán)境和遺傳因素共同作用引起的復(fù)雜性多基因遺傳疾病，嚴重威脅著人類的健康，針對冠心病易感基因的研究一直備受重視。原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH)作為冠心病的重要病因之一，也是一種多基因遺傳疾病，通過損傷血管內(nèi)皮引發(fā)炎癥反應(yīng)導(dǎo)致冠狀動脈粥樣硬化的形成。提示兩者之間可能存在共同的易感基因和發(fā)病機制。但是由于兩種疾病

2、均具有復(fù)雜遺傳疾病的特點，如未知、復(fù)雜的遺傳模式，遺傳異質(zhì)性，及表型異質(zhì)性等，迄今為止，對高血壓誘發(fā)冠心病機制的研究，大多集中在蛋白質(zhì)-核酸水平，兩者之間的分子遺傳學(xué)機制仍不十分清楚。本研究將DNA混合池(DNA pooling)方法與芯片技術(shù)相結(jié)合，通過高密度篩查及關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)冠心病及高血壓的易感基因并探求兩者之間的聯(lián)系。
　　方法:
　　1.選取在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院心內(nèi)科住院并經(jīng)冠狀動脈造影確診的冠心病合并高血壓患者作為病

3、例組，共115例;山東省血液中心的健康獻血者作為對照組，共1，000例;此外，冠心病合并高血壓重復(fù)驗證組，共115例;原發(fā)性高血壓驗證組，共450例;冠心病合并高血壓合并糖尿病合并血脂異常驗證組，共146例;冠心病綜合驗證組，共607例。研究對象均已進行知情告知，且個體之間無血緣關(guān)系。
　　2.采集外周靜脈血5ml，經(jīng)EDTA抗凝，使用Lab-Aid核酸(DNA)分離試劑盒，及Lab-Aid820核酸自動提取儀，用磁珠法提取全血D

4、NA。用NANODROP2000超微量核酸蛋白測定儀（Thermo scientific，美國）檢測DNA樣本濃度。用三蒸水將所有DNA樣品稀釋至終濃度10ng/μl，每份濃度為10ng/μl的DNA溶液中取10μl進行混合，最終濃度仍為10ng/μl。建立兩組DNA混合池樣本，分別為115例冠心病合并高血壓患者組和1，000例正常人對照組。
　　3.經(jīng)過DNA酶切、連接及擴增，PCR產(chǎn)物純化和定量，PCR產(chǎn)物片段化及PCR產(chǎn)物標

5、記和雜交，然后用Array Holding Buffer對人類SNP6.0芯片（Affymetrix Genome-Wide Human SNP Array6.0）進行清洗，最后在Affymetrix7G芯片掃描儀（AFFX，美國）中進行樣本掃描。
　　4.統(tǒng)計分析，應(yīng)用Genotyping Console軟件對掃描后數(shù)據(jù)進行基因分型，得到全基因組等位基因圖譜，比較病例組與對照組的各SNP位點的等位基因頻率并進行卡方檢驗。最終得到

6、有差異的SNP位點等位基因型，初步的拷貝數(shù)(copy number，CN)和關(guān)聯(lián)分析(association analysis)結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　本次研究，共得到1號染色體上71，480個SNP位點的基因分型數(shù)據(jù)，其中5個SNP位點與冠心病合并高血壓高度相關(guān)(p≤6.96×10-8)，分別為rs12120090(lp31.1)、rs2788417(lp13.2)、rs17347980(lq32.1)、rs1701893

7、3(lq32.3)和rs1218660(lq43)。在對該結(jié)果的驗證實驗中同樣發(fā)現(xiàn)這5個位點與冠心病合并高血壓密切相關(guān)。并且發(fā)現(xiàn)這5個位點不僅與冠心病合并高血壓相關(guān)，也與糖尿病等危險因素關(guān)系密切。此外，這5個位點附近相應(yīng)的基因分別為ELTD1、CTTNBP2NL、NUCKS1、PPP2R5A和CHRM3，在中國漢族人群中與冠心病的關(guān)聯(lián)報道尚屬首次。
　　結(jié)論:
　　中國漢族冠心病人群中，rs12120090(lp31.1)、