人卵母細(xì)胞第一極體活檢及熒光原位雜交對(duì)非整倍體診斷的研究.pdf

1、目的:利用細(xì)胞松弛素B(CB)對(duì)小鼠卵母細(xì)胞預(yù)處理，建立鼠卵單精子卵胞漿內(nèi)注射(ICSI)并第一極體活檢的模型。研究活檢極體對(duì)卵母細(xì)胞受精及胚胎發(fā)育的影響，為人卵母細(xì)胞第一極體活檢做理論和技術(shù)準(zhǔn)備。 方法:以昆明品系性成熟小鼠為實(shí)驗(yàn)材料，設(shè)定活檢組和對(duì)照組。再按是否予CB對(duì)鼠卵預(yù)處理，分為CB組和無(wú)CB組。將獲取的成熟卵母細(xì)胞行ICSL活檢組采用激光切割透明帶活檢出第一極體，培養(yǎng)小鼠胚胎至囊胚期。對(duì)照組在ICSI術(shù)后直接培養(yǎng)至囊

2、胚期。觀察并比較兩組的受精率、卵裂率和囊胚形成率。 結(jié)果:激光法活檢小鼠卵母細(xì)胞第一極體成功率90％。無(wú)CB預(yù)處理時(shí)，小鼠卵母細(xì)胞死亡率高。存活的鼠卵中，第一極體活檢組和對(duì)照組之間受精率、卵裂率、桑椹胚及囊胚形成率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)。CB處理時(shí)，小鼠卵母細(xì)胞死亡減低。存活的鼠卵中，第一極體活檢組和對(duì)照組之間受精率、卵裂率、桑椹胚及囊胚形成率亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)。CB處理后小鼠卵母細(xì)胞ICSI后的存活率顯著提高

3、(P<0.01)，存活鼠卵受精率增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)建立了小鼠卵母細(xì)胞第一極體活檢的模型，并且發(fā)現(xiàn)利用細(xì)胞松弛素B預(yù)處理更利于此動(dòng)物模型的建立； 2.激光打孔活檢小鼠第一極體安全有效； 3.小鼠第一極體的活檢對(duì)卵母細(xì)胞的受精及胚胎后續(xù)發(fā)育無(wú)不良影響。 方法:利用廢棄的卵母細(xì)胞行ICSI術(shù)，后行激光切割透明帶法活檢第一極體，觀察活檢后卵母細(xì)胞受精及胚胎后續(xù)發(fā)育情況。同時(shí)，和僅行

4、ICSI組的對(duì)照組比較，觀察兩組雙原核率、卵裂率及囊胚形成率有無(wú)差別。按形態(tài)對(duì)第一極體進(jìn)行分級(jí)，比較不同形態(tài)的極體活檢對(duì)胚胎后續(xù)發(fā)育的影響。 結(jié)果:激光打孔法活檢人卵母細(xì)胞第一極體成功率95.3％。活檢組和對(duì)照組在兩原核(2PN)形成率、卵裂率及囊胚形成率上均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。不同形態(tài)第一極體的卵母細(xì)胞2PN形成率、卵裂率無(wú)差別(P>0.05)，囊胚形成率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)?；顧z組和對(duì)照組對(duì)應(yīng)形態(tài)級(jí)別第一極