SU11274影響食管癌Eca109細(xì)胞生物學(xué)行為的時(shí)辰效應(yīng)探討.pdf

1、目的：本文旨在研究c-Met抑制劑Sull274對(duì)食管癌Ecal09細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響，并通過其作用靶點(diǎn)c-Met蛋白和C-met mRNA與生物鐘基因Clock mRNA的可能潛在聯(lián)系，進(jìn)一步探討在其作用過程中是否有時(shí)辰效應(yīng)的存在。
　　 方法：(1)體外培養(yǎng)食管癌Ecal09細(xì)胞株，用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)c-Met蛋白的表達(dá)。(2)用SUll274(IC50為20nM)處理Ecal09細(xì)胞，通過MTT生長(zhǎng)曲線、劃痕實(shí)驗(yàn)、tr

2、answell侵襲小室以及FCM，觀察藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、侵襲能力以及凋亡率與細(xì)胞周期的影響。(3)體外培養(yǎng)食管癌Ecal09細(xì)胞株，用RT-PCR法分別檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)Clock與C-met mRNA的表達(dá)。(4)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)c-Met蛋白的表達(dá)。(5)不同時(shí)間點(diǎn)SUll274處理細(xì)胞24h后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。
　　 結(jié)果：(1)Ecal09細(xì)胞表達(dá)c-Met蛋白。(2)SUll274實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)，遷移

3、和浸潤(rùn)能力低于對(duì)照組，凋亡率高于對(duì)照組，增殖指數(shù)低于對(duì)照組。(3)48h內(nèi)Clock基因表達(dá)呈節(jié)律性波動(dòng)(P<0.05)。(4)24h內(nèi)Clock與C-met基因表達(dá)呈相似節(jié)律性波動(dòng)(P<0.01)，。(5)24h內(nèi)c-Met蛋白表達(dá)呈節(jié)律性波動(dòng)(P<0.05)，出現(xiàn)表達(dá)高峰的時(shí)間點(diǎn)與C-met mRNA表達(dá)高峰時(shí)間點(diǎn)一致。(6)不同時(shí)間點(diǎn)SUll274處理細(xì)胞后，細(xì)胞增殖指數(shù)抑制率不同(P<0.01)。
　　 結(jié)論：(1)c-