谷氨酰胺強(qiáng)化腸外營養(yǎng)對大鼠小腸粘膜缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的:正常腸粘膜細(xì)胞對缺血極不耐受，當(dāng)機(jī)體發(fā)生小腸移植、創(chuàng)傷、嚴(yán)重感染及失血性休克等嚴(yán)重應(yīng)激反應(yīng)時(shí)，小腸可出現(xiàn)血液低灌注并造成大量氧自由基及細(xì)胞因子的產(chǎn)生與釋放，從而發(fā)生缺血再灌注損傷（Ischemia/Reperfusion Injury，IRI）。谷氨酰胺（Glutamine，Gln）是一種具有多種生物活性作用的“條件必需氨基酸”，是小腸黏膜重要的代謝能源。在上述病理狀態(tài)下，谷氨酰胺消耗大大增加，使得體內(nèi)Gln缺乏，從而誘發(fā)或加重腸

2、粘膜損傷。研究顯示通過外源性補(bǔ)充谷氨酰胺可代償其過度消耗，在防止缺血再灌注損傷方面具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)利用大鼠小腸缺血再灌注模型，觀察谷氨酰胺強(qiáng)化腸外營養(yǎng)對大鼠小腸粘膜屏障作用的影響，并檢測血紅氧和酶－1（HO－1）表達(dá)進(jìn)而探討谷氨酰胺作用的可能機(jī)制。 資料和方法: 1、實(shí)驗(yàn)動物及分組：雌性Wistar大鼠（山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供）30只，隨機(jī)分為三組：正常對照組（N組，n=10），傳統(tǒng)腸外營養(yǎng)組（total pare

3、nteral nutrition，TPN組，n=10）和谷氨酰胺強(qiáng)化腸外營養(yǎng)組（TPN+Gln組，n=10）。 2、動物模型：適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后，無菌條件下經(jīng)腹正中切口入腹，顯露腸系膜上動脈。正常對照組只輕柔的翻動相關(guān)腸段數(shù)次后置回腹腔，另外兩組用無創(chuàng)動脈夾夾閉腸系膜上動脈30min，松開止血夾再灌注4小時(shí)后縫合關(guān)腹。參照Steiger等的方法將大鼠麻醉后經(jīng)頸外靜脈行上腔靜脈置管，固定并將導(dǎo)管經(jīng)皮下隧道自頸背部引出。置管當(dāng)日起TP

4、N組和TPN+Gln組予以完全腸外營養(yǎng)，共給予5天；正常對照組以常規(guī)飼料喂養(yǎng)。5天后后剖殺取材。 3．觀察指標(biāo)：包括光學(xué)顯微鏡下觀察HE染色小腸粘膜形態(tài)，采用高效液相色譜儀測定靜脈血漿及粘膜細(xì)胞內(nèi)Gln濃度，改良的酶學(xué)分光光度法檢測血漿D-乳酸水平，偶氮顯色鰲試劑法測定血漿內(nèi)毒素水平，ELISA法檢測炎性介質(zhì)TNF-α和IL-6，以及免疫組織化學(xué)法染色小腸粘膜監(jiān)測HO-1蛋白的表達(dá)和RT-PCR法檢測粘膜細(xì)胞HO-1mRNA的表

5、達(dá)。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS15．0軟件，所有數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較經(jīng)t檢驗(yàn)處理，p<0．05為差異有顯著性，p<0．01為非常顯著性差異。 結(jié)果: 1．外源性補(bǔ)充谷氨酰胺可明顯提高血漿和小腸粘膜谷氨酰胺水平。 2．外源性補(bǔ)充谷氨酰胺可明顯改善缺血再灌注小腸粘膜組織形態(tài)，降低血漿D-乳酸、內(nèi)毒素和TNF-α、IL-6水平，促進(jìn)HO-1蛋白和HO-1mRNA表達(dá)。 結(jié)論: 1．通過