小檗堿對兔動脈粥樣硬化干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的與背景： 隨著人們生活水平的提高及生活方式的轉(zhuǎn)變，動脈粥樣硬化疾病已成為我國人群的首要死亡原因[1]。研究表明[2]，動脈粥樣(Atherosclerosis，AS)是由多種病理過程包括炎細(xì)胞的浸潤、平滑肌細(xì)胞的增殖、細(xì)胞外基質(zhì)的增加、斑塊破裂及血栓形成等參與的慢性炎癥性疾病。高膽固醇血癥、高血壓、糖尿病、吸煙等危險(xiǎn)因子都能損傷血管內(nèi)皮，使內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞表面特性發(fā)生變化而促進(jìn)炎癥反應(yīng)；粒細(xì)胞，包括單核細(xì)胞進(jìn)入發(fā)生炎癥反應(yīng)的

2、內(nèi)皮細(xì)胞，增加黏附分子及其他炎癥介質(zhì)的表達(dá)，促使巨噬細(xì)胞攝取氧化修飾脂蛋白增加。T細(xì)胞也進(jìn)入內(nèi)膜，并分泌細(xì)胞因子，擴(kuò)大炎癥級聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞的遷移及增殖。炎癥介質(zhì)還可以減弱斑塊的纖維帽，導(dǎo)致血栓形成而引發(fā)急性心腦血管事件。 小檗堿(berberine，BBR)，由黃連、黃柏、三棵針或其他含小檗堿的植物中提取的生物堿?，F(xiàn)代研究認(rèn)為小檗堿具有良好的降糖、降脂作用，但其抗動脈粥樣硬化及穩(wěn)定斑塊方面作用如何尚不明確。

3、本研究旨在觀察BBR對家兔動脈粥樣硬化斑塊發(fā)生及斑塊破裂、血栓形成的影像，并探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 1、動物模型的建立 雄性純種新西蘭大白兔40只，體重1.5～2.5 kg，由蘇州大學(xué)提供。隨機(jī)平均分成四組，第一組：普通飼料喂養(yǎng)、第二組：單純球囊損傷+高脂(1％膽固醇)、第三組：球囊損傷+高脂+小檗堿干預(yù)和第四組：球囊損傷+高脂+他汀干預(yù)。30只新西蘭大白兔先高脂飲食喂養(yǎng)1周，對其進(jìn)行動脈內(nèi)膜損傷術(shù)再繼續(xù)

4、予高脂飲食喂養(yǎng)。第一組、第二組20只不做藥物干預(yù)；第三組10只，予小檗堿灌胃(0.1g／Kg)，每天1次；第四組10只，予辛伐他汀灌胃(5mg／Kg)，每天1次。所有兔均自由飲水，持續(xù)喂養(yǎng)12周。12周末，處死兔子，取材，進(jìn)行分析。12周末，處死動物前給予魯塞爾蝰蛇毒(RVV)及組胺進(jìn)行藥物觸發(fā)。 2、檢測指標(biāo) (1)血清生化指標(biāo)及炎癥因子檢測分別于實(shí)驗(yàn)開始及12周末藥物觸發(fā)前抽取空腹血檢測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯

5、(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平。12周末，藥物觸發(fā)前抽取空腹血采用酶聯(lián)免疫法檢測血清OxLDL、MCP-1、MMP-9、TIMP-1、Lp-PLA2水平。 (2)病理學(xué)檢測： 取出腹主動脈切開，觀察斑塊破裂和血栓形成情況。截取主動脈斑塊段給予蘇木素-伊紅(HE)染色，利用微機(jī)圖像處理測量系統(tǒng)對切片進(jìn)行圖像攝取和轉(zhuǎn)換，測量病變內(nèi)、中膜的厚度。 3、統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用SPSS-13.

6、0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。連續(xù)性數(shù)據(jù)用x±SD表示，各組間指標(biāo)的比較應(yīng)用單因素方差分析，采用Pearson相關(guān)分析研究斑塊評分和其相關(guān)因素之間的關(guān)系。P值<0.05、P值<0.01均認(rèn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性，均為雙側(cè)檢驗(yàn)。 結(jié)果： (1)最終完成實(shí)驗(yàn)兔共35只，其中第一、二及三組各9只，第四組8只。藥物激發(fā)后第二組九只實(shí)驗(yàn)兔有五只發(fā)生斑塊破裂與血栓形成，其余三組均無斑塊破裂與血栓形成。 (2)實(shí)驗(yàn)前四組間TC、TG、

7、LDL-c、HDL-c水平無顯著差異(p>0.05)；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)后三組TC、TG、LDL-c水平均較實(shí)驗(yàn)前顯著增高(p<0.001)，而第一組均無顯著變化p>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)后三組TC、TG、LDL-c水平均較第一組顯著增高(p<0.001)，而三、四組兩組TC、TG、LDL-c水平較第二組顯著降低(p<0.01)，三、四組兩組無顯著差異(p>0.05)。 (3)后三組與普通飼料喂養(yǎng)(第一組)比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)血清LP-PL

8、A2、OX-LDL、MCP-1、MMP-9的水平均顯著升高(P<0.01～0.05)；血清TIMP-1水平顯著降低(P<0.01～0.05)。而第二組血清LP-PLA2、OX-LDL、MCP-1、MMP-9水平最高，與三、四組比顯著升高(P<0.01～0.05)；血清TIMP-1水平最低，與三、四組比顯著降低。 (4)病理學(xué)檢查：第一組血管內(nèi)膜薄且結(jié)構(gòu)完整，第二組可見主動脈脂質(zhì)斑塊彌漫或散在，內(nèi)膜增厚，內(nèi)皮不完整，泡沫細(xì)胞大量積

9、聚。3組和4組斑塊厚度很小，泡沫細(xì)胞數(shù)目較少，體積減小，胞內(nèi)脂肪空泡明顯減少。通過圖像分析系統(tǒng)處理發(fā)現(xiàn)第二組(陽性對照組)彈力纖維的完整性遭到明顯破壞，呈斷續(xù)排列，內(nèi)膜呈非均勻性明顯增厚，中膜萎縮變薄，內(nèi)膜厚度超過中膜。小檗堿組彈力纖維破壞不明顯，仍呈連續(xù)排列，內(nèi)膜也有局限性輕度增厚，中膜變薄不明顯，內(nèi)膜厚度小于中膜厚度，內(nèi)膜厚度／中膜厚度值較第二組顯著減低。小檗堿干預(yù)組與第四組：辛伐他汀干預(yù)組內(nèi)．中膜厚度及內(nèi)膜厚度／中膜厚度值無明顯差

10、異。 (5)將標(biāo)本大體形態(tài)觀察斑塊分級0、0.5、1、2、3及4級分別評分為1、2、3、4、5及6分。相關(guān)分析結(jié)果顯示斑塊評分與血清OxLDL、Lp-PL,A2、MCP-1及MMP-9水平呈正相關(guān)(r分別為0.915，0.945，0.967，0.906，p<0.01)；而血清TIMP-1水平與斑塊評分呈負(fù)相關(guān)(r=0.937，p<0.01)。 結(jié)論： 1.BBR可顯著降低實(shí)驗(yàn)兔血清TC、TG及LDL-C水平；同