犬科動物（藍狐、犬）卵母細胞體外成熟的研究.pdf

1、本試驗對影響犬科動物—發(fā)情期前后的犬、間情期的藍狐卵母細胞體外成熟的條件進行了優(yōu)化篩選，以便確立犬、藍狐卵母細胞體外培養(yǎng)最佳成熟條件。實驗內容包括：1)不同血清蛋白及表皮生長因子對間情期藍狐卵母細胞體外成熟的影響；2)在相同的基礎培養(yǎng)液(M199+10％FBS)中添加不同的激素組合，比較不同的激素對間情期藍狐卵母細胞成熟的影響效果；3)卵巢采集后保存時間和保存溫度對間情期藍狐卵母細胞體外成熟的影響；4)電刺激對間情期藍狐卵母細胞體外成熟

2、的影響；5)不同的培養(yǎng)液對發(fā)情期犬卵母細胞體外成熟的影響。試驗證明，藍狐卵母細胞在M199+10％FBS+10ng/mlEGF+10IU/mlPMSG+10IU/mlhCG中培養(yǎng)96h時MⅡ期發(fā)育率極顯著高于其它各組(12.28％)(p＜0.01)。卵母細胞在培養(yǎng)72h～120h均有MⅡ，但在培養(yǎng)96h時(12.28％)高于72h和120h(6.67％，7.10％)(P＞0.05)。 藍狐卵母細胞在相同的基礎培養(yǎng)液中(M199+

3、10％FBS+10ng/mlEGF)添加不同的激素組合FSH+LH、FSH+hCG、PMSG+hCG、PMSG+hCG(48h后換為無激素)，培養(yǎng)96h時比較各組卵母細胞成熟情況。實驗中添加FSH+LH組的MⅡ發(fā)育率(9.92％)與添加其它激素組合相比差異不顯著(P＞0.05)，但明顯高于其它組合。此外，結果表明添加激素組MⅡ發(fā)育率明顯高于對照組(3.11％)(P＞0.05)。 藍狐卵巢離體后保存時間越長，獲得卵母細胞形態(tài)正常率

4、越低。在卵巢保存時間為5h時，入孵可用卵(40.01％)極顯著高于保存時間為10h組(20％)(p＜0.01)；入孵后卵母細胞MⅡ(9.65％)發(fā)育率高于10h組(7.77％)，但差異不顯著(P＞0.05)。同時證明，卵巢保存的溫度分別控制在34℃與28℃時卵母細胞體外成熟率差異不顯著(P＞0.05)。 藍狐卵母細胞在M199+10％FBS+10ng/μlEGF+10IU/mlPMSG+10IU/mlhCG培養(yǎng)96h后，施加不同

5、場強及脈沖時程的電脈沖刺激后，移入SOF液中繼續(xù)培養(yǎng)48h，觀察其成熟率、孤雌發(fā)育率。結果表明，施加場強130Vmm-1、脈沖時程80μs、單次脈沖后卵母細胞成熟率最高(60.34％)。 發(fā)情期犬卵母細胞在成熟培養(yǎng)液M199+10ng/mlEGF中(A)液：加有蛋白、激素FBS+FSH+hCG與(B)液：加有能量物質PVA，培養(yǎng)48h時A液中卵母細胞的成熟率(7.84％)；而B液中卻未發(fā)現(xiàn)成熟的卵母細胞；培養(yǎng)到72h時B液中卵母