胞飲突、整合素β3和骨橋蛋白在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析.pdf

1、目的：多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovary Syndrome，PCOS)是育齡婦女最常見的婦科內(nèi)分泌疾病之一，是無排卵性不孕的主要原因。PCOS患者由于內(nèi)分泌紊亂，常常存在排卵障礙，即使有自主排卵的PCOS患者妊娠率也較正常婦女低下，或在應(yīng)用促排卵方法時，仍然存在高排卵率、低妊娠率的現(xiàn)象。其原因可能是PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性下降所致。部分不孕的PCOS患者，往往會采取IVF-ET(體外受精-胚胎移植In vitro fer

2、tilization-embryo transfer，IVF)或者IVM(未成熟卵母細胞體外培養(yǎng)，In vitro maturation，IVM)解決生育問題。子宮內(nèi)膜容受性是妊娠成功的一個重要因素。近年來，胞飲突作為評價子宮內(nèi)膜容受性的形態(tài)學(xué)指標(biāo)已經(jīng)被廣大學(xué)者所接受，同時一些內(nèi)膜蛋白的表達能夠更好的顯示著床期子宮內(nèi)膜的功能狀態(tài)。其中整合素(Integrin)(尤其是avβ3)和骨橋蛋白(Osteopotion，OPN)在子宮內(nèi)膜的表達

3、呈周期性，在子宮內(nèi)膜中的高表達與子宮內(nèi)膜植入窗的開啟一致，是目前公認的子宮內(nèi)膜容受性標(biāo)志物。在黃體發(fā)育延遲、輸卵管積水、子宮內(nèi)膜異位癥等原因所致的不孕婦女中，avβ3在植入窗期的子宮內(nèi)膜中表達明顯下調(diào)。本文以PCOS患者植入窗期的子宮內(nèi)膜為研究對象，從形態(tài)學(xué)、超聲學(xué)、分子生物學(xué)和內(nèi)分泌學(xué)四個方面了解其子宮內(nèi)膜容受性的狀態(tài)，以尋找其妊娠率較正常育齡期婦女低下的原因，為PCOS患者不孕的治療提供理論依據(jù)。本研究分兩部分對PCOS患者植入窗期

4、子宮內(nèi)膜容受性進行探討。第一部分為：胞飲突在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析；第二部分：整合素β3和骨橋蛋白在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析。 第一部分胞飲突在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析 目的:掃描電子顯微鏡觀察有自主排卵的或無自主排卵經(jīng)促排卵治療的PCOS患者植入窗期子宮內(nèi)膜胞飲突的超微結(jié)構(gòu)和發(fā)育情況，及其影響因素。 方法： 采用病例一對照研究的方法，選

5、取15名典型PCOS患者(7例自主排卵和8例促排卵)和15名正常對照婦女，月經(jīng)8～10d起行陰道超聲動態(tài)監(jiān)測卵泡發(fā)育，排卵后第7d以取內(nèi)膜器在消毒下行子宮內(nèi)膜活檢。HE染色后觀察子宮內(nèi)膜的一般組織學(xué)形態(tài)；SEM(Scanning electron microscope，SEM)觀察子宮內(nèi)膜腔上皮的超微結(jié)構(gòu)-胞飲突的形態(tài)和發(fā)育情況；陰道超聲監(jiān)測排卵當(dāng)日的子宮內(nèi)膜分型和厚度；化學(xué)免疫發(fā)光法檢測內(nèi)膜活檢當(dāng)天的雌二醇(Estradiol，E2)

6、和孕酮(Progesterone，P)的濃度。探討胞飲突的發(fā)育情況與E2、P和E2/P以及子宮內(nèi)膜厚度及分型之間的關(guān)系。與正常育齡期婦女相比，總結(jié)PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性的形態(tài)學(xué)和超聲學(xué)指標(biāo)的變化。 結(jié)果： 1.病例組和對照組一般情況比較病例組和對照組婦女各15例，兩組間年齡(29.07±3.65vs29.13±3.44)和BMI(體重指數(shù)，body mass index，BMI)(23.07±2.86vs25.74±

7、4.30)的比較統(tǒng)計學(xué)上無顯著性差異(P＞0.05)；病例組LH/FSH(Luteinizing hormone/Folliclestimulating hormone)(1.41±0.81vs0.78±0.22)和T(Testrone)(2.37±1.31vs1.57±0.44)值的比較，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異(P＜0.05)。 2.子宮內(nèi)膜組織的光鏡結(jié)果常規(guī)HE染色，光鏡下觀察：對照組腺體豐富粗大、彎曲，腺上皮成單層高柱狀排列

8、，腺腔變寬，胞質(zhì)豐富，細胞核位于細胞基部，核卵圓形，出現(xiàn)核上空泡，核上區(qū)胞質(zhì)染成粉紅色。腺腔內(nèi)充滿了含有糖原的嗜酸性分泌物，呈均質(zhì)狀。間質(zhì)疏松，血管豐富，細胞呈卵圓形或星形，核卵圓。對照組15例子宮內(nèi)膜組織學(xué)分期均處于分泌中期。病例組較正常對照組相比，腺體小，腺腔狹窄，腺腔中無或少量均質(zhì)狀嗜酸性分泌物，個別腺腔中有炎性細胞分布，甚至有自溶傾向。間質(zhì)致密。病例組處于分泌中期10例(占66.67％)，未能達到分泌中期共5例，包括早分泌期4例

9、和增生期1例(占33.33％)，較對照組差異有顯著性(P＜0.05)。 3.子宮內(nèi)膜組織掃描電子顯微鏡結(jié)果SEM下觀察正常對照組大量微絨毛粗壯整齊，覆蓋在分泌細胞表面。纖毛細胞直立，呈簇狀，與微絨毛的分布比例約為1:20～1:30。微絨毛細胞和纖毛細胞排列整齊，胞飲突圓潤飽滿。SEM低倍鏡下PCOS患者部分子宮內(nèi)膜纖毛細胞和微絨毛細胞排列紊亂,失去正常比例，有的纖毛細胞纖毛缺如，或纖毛倒伏，短小雜亂，糾集纖細。高倍鏡下微絨毛細胞

10、微絨毛發(fā)育細小稀少，胞飲突無發(fā)育或低小，個別出現(xiàn)凋亡。正常對照組均檢測到了胞飲突，10例處于發(fā)育完全成熟階段，3例處于發(fā)育中階段，2例處于衰退階段。PCOS組大部分病例檢測到了胞飲突，其中1例無胞飲突發(fā)育。以下是兩組胞飲突的豐富率的比較。兩組相比較，有顯著性差異(P＜0.01)。 4 排卵日子宮內(nèi)膜厚度及分型測定的結(jié)果正常對照組排卵日的子宮內(nèi)膜厚度為(10.57±2.19)mm，病例組為(10.53±2.01)mm，兩組相比無統(tǒng)

11、計學(xué)意義(P＞0.05)；正常對照組排卵日的子宮內(nèi)膜分型為A型10例，B型5例，C型0例；病例組為A型4例，B型7例，C型4例；兩組相比有顯著性差別，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 5 植入窗期血清性激素測定的結(jié)果病例組植入窗期血清E2水平(215.81±91.28)pg/ml，明顯高于對照組水平(148.53±52.99)pg/ml，有顯著性差異(P＜0.01)；而同期血清P水平明顯低于對照組(14.00±3.87vs16.8

12、9±2.70)pg/ml，有顯著性差異(P＜0.01)；病例組血清E2/P比值明顯高于對照組(13.01±4.84vs7.97±3.76)，有顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.PCOS患者胞飲突發(fā)育不良，豐富率降低，子宮內(nèi)膜容受性下降。 2.PCOS患者排卵日的子宮內(nèi)膜厚度與對照組無統(tǒng)計學(xué)上的差異，但分型欠佳，是導(dǎo)致妊娠率低下原因之一。 3.E2/P比值失調(diào)是導(dǎo)致胞飲突在PCOS患者子宮內(nèi)膜表達下

13、調(diào)的重要原因之一，從而影響胚胎著床。 第二部分整合素β3和骨橋蛋白在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析 目的:探討整合素αvβ3和OPN在PCOS患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達情況，及αvβ3和OPN表達的相關(guān)性。 方法： 子宮內(nèi)膜的獲取同第一部分。應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測整合素αvβ3和OPN在PCOS患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達情況，并應(yīng)用Motic Med6。0醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)分析

14、。 結(jié)果： 1整合素β3和骨橋蛋白在子宮內(nèi)膜中的表達整合素αvβ3在子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮細胞的細胞膜和細胞質(zhì)中，呈陽性表達，棕褐色，呈均質(zhì)狀。病例組整合素αvβ3在子宮內(nèi)膜的表達顯著低于正常對照組，有顯著性差異(P＜0.01)。OPN定位于子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮細胞的細胞膜和細胞質(zhì)及部分間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)中，呈陽性表達，棕褐色，呈均質(zhì)狀。病例組OPN在子宮內(nèi)膜中的表達亦顯著低于正常對照組，有顯著性差異(P＜0.01)。

15、 2相關(guān)性檢驗 對照組整合素αvβ3與OPN呈正相關(guān)，P=0.0007，r=0.7746；病例組整合素αvβ3與OPN亦呈正相關(guān)，P=0.0333，r=0.5509。 結(jié)論： 1.整合素αvβ3在子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮細胞的細胞膜和細胞質(zhì)中，呈陽性表達，棕褐色，呈均質(zhì)狀；OPN定位于子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮細胞的細胞膜和細胞質(zhì)及部分間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)中，呈陽性表達，棕褐色，呈均質(zhì)狀。 2.整合素αvβ3