補(bǔ)陽還五湯對脊髓損傷大鼠脊髓組織PAF含量及超微結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、目的:探討補(bǔ)陽還五湯(Buyang Huanwu Decoction，BYHWD)對脊髓損傷(SpinalCord Injury，SCI)大鼠脊髓組織血小板活化因子(Platelet Activating Factor，PAF)含量及超微結(jié)構(gòu)的影響，從微觀角度探討脊髓損傷的病理機(jī)制，闡明傳統(tǒng)中藥復(fù)方BYHWD防治SCI的作用靶點(diǎn)，為其在促進(jìn)神經(jīng)損傷修復(fù)的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:應(yīng)用SPF級Wistar大鼠76只，體重

2、(195±10)g，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)大鼠先按性別分層，然后根據(jù)體重采用隨機(jī)數(shù)字表法分組，其中正常組(Group A)16只，造模組60只，造模大鼠采用Allen's打擊法制作中度SCI模型。造模完成后先觀察傷情，待傷情穩(wěn)定一周后，參照改良Tarlov評分標(biāo)準(zhǔn)，選擇后肢運(yùn)動功能障礙評分為2～3分的模型大鼠48只，分為模型組(Group B)、BYHWD組(Group C)、金納多組(Group D)，每組16只模型大鼠。BYHWD組給予BY

3、HWD40g/kg·W，金納多組給予金納多45.5mg/kg·W；正常組及模型組給予相同體積的蒸餾水，用藥2w結(jié)束實(shí)驗(yàn)。于造模前(即0d)、造模后3d、1w、2w、3w，對實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行稱重；同時采用Tarlov評分標(biāo)準(zhǔn)評價各組大鼠后肢運(yùn)動功能；用藥結(jié)束后，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法)檢測SCI大鼠脊髓組織中PAF含量；取SCI大鼠脊髓組織制片行HE染色光鏡和透射電子顯微鏡觀察組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果:(1)體重

4、分析結(jié)果：正常組大鼠體重在0d～3w內(nèi)平穩(wěn)增加；造模損傷使大鼠體重明顯降低，模型組與正常組時間效應(yīng)趨勢比較差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，模型用藥組與模型組比較差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，而模型用藥組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；用藥前即造模后3d～1w，模型用藥組體重增長緩慢，與模型組同時間點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；給藥后，各組大鼠體重大小依次為：正常組>BYHWD組>金納多組>模型組，B

5、YHWD組與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與金納多組及模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (2)大鼠后肢運(yùn)動功能Tarlov評分結(jié)果：在0d～3w內(nèi)，正常組大鼠后肢運(yùn)動功能Tarlov評分無明顯變化；BYHWD組與金納多組評分隨時間變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與模型組及正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；各時間點(diǎn)組間比較結(jié)果：造模后3d，模型組大鼠評分顯著降低，與正常組比較差異有顯

6、著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，各造模組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；用藥前即造模后3d～1w，模型組大鼠后肢運(yùn)動功能恢復(fù)緩慢；灌胃給藥后即造模后1w～3w，模型用藥組大鼠后肢運(yùn)動功能明顯恢復(fù)，與模型組同時間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而BYHWD組與金納多組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 (3)脊髓組織PAF含量分析結(jié)果：正常組大鼠脊髓組織PAF含量維持在較低水平，模型組脊髓組織PAF含量明

7、顯高于正常組(P<0.01)，BYHWD及金納多均可明顯降低SCI大鼠脊髓組織PAF含量，與模型組比較差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，而BYHWD組SCI大鼠脊髓組織PAF含量明顯低于金納多組，兩者比較差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 (4)脊髓組織HE染色觀察結(jié)果：正常組細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列整齊，神經(jīng)元細(xì)胞分布均勻、形態(tài)正常，無神經(jīng)元細(xì)胞壞死現(xiàn)象；模型組損傷區(qū)出現(xiàn)大片出血，胞漿滲出、細(xì)胞腫脹、尼氏體消失、細(xì)胞核呈

8、游散狀態(tài)，形成巨大空腔，呈囊腔樣病變；BYHWD組損傷區(qū)部分神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)已基本趨于正常，數(shù)目也增多，組織分布均勻；偶見新生毛細(xì)血管，少量細(xì)胞核固縮；但金納多組損傷區(qū)神經(jīng)組織分布依舊疏松，仍可見巨大的空腔，出現(xiàn)數(shù)量較多的微囊，神經(jīng)元細(xì)胞核固縮現(xiàn)象有所改善；脊髓組織修復(fù)呈以下趨勢：BYHWD組>金納多組>模型組。
　　 (5)脊髓組織透射電鏡觀察結(jié)果：正常組脊髓組織超微結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清楚，胞質(zhì)內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)正常，髓鞘

9、輪廓光整，多處于靜止相；模型組表現(xiàn)線粒體體積增大，髓鞘腫脹嚴(yán)重，鞘內(nèi)腔擴(kuò)大，多數(shù)線粒體髓鞘斷裂溶解；BYHWD組神經(jīng)元細(xì)胞線粒體髓鞘膜較完整，部分可見髓鞘板層修復(fù)緊密，新生的髓鞘聚集在微血管周圍，內(nèi)膜的微血管可見增生；金納多組部分線粒體髓鞘斷裂溶解、膜破裂和線粒體數(shù)量減少，有空泡現(xiàn)象存在，線粒體外形不易辨認(rèn)，部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)修復(fù)。超微結(jié)構(gòu)病理變化視覺評分顯示胞內(nèi)和灰質(zhì)內(nèi)空泡存在現(xiàn)象修復(fù)程度呈以下趨勢：BYHWD組>金納多組>模型組。

10、　　 結(jié)論:(1)SCI后，模型大鼠的體重和后肢運(yùn)動功能均明顯降低，BYHWD給藥后可顯著改善模型大鼠的后肢運(yùn)動功能，促進(jìn)大鼠體重恢復(fù)和增長；
　　 (2)SCI后，由于損傷脊髓PAF的過度生成及異常釋放，損傷脊髓組織PAF含量明顯增多，而BYHWD可顯著降低SCI大鼠脊髓組織PAF含量，以減輕大量PAF對脊髓組織的繼發(fā)性損傷；
　　 (3)BYHWD能有效保護(hù)損傷脊髓組織的組織結(jié)構(gòu)繼發(fā)性損傷，營養(yǎng)神經(jīng)元細(xì)胞，促進(jìn)神經(jīng)