雞復(fù)等位基因BF2和β2m二級結(jié)構(gòu)比較及其鑒定的病毒表位的免疫效果.pdf

1、為比較雞主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ(MHCⅠ)類分子復(fù)等位基因重鏈胞外區(qū)(BF2)和輕鏈成熟肽的空間結(jié)構(gòu)，篩選與不同類MHCⅠ類分子結(jié)合的T細(xì)胞抗原表位，驗(yàn)證與雞MHCⅠ類分子結(jié)合的T細(xì)胞表位多肽的免疫效果，本研究克隆到雞五類MHCⅠ類分子的胞外區(qū)基因和一類雞β2m(β2m-Z01)成熟肽基因；并通過一富含甘氨酸絲氨酸接頭(G4S)3串聯(lián)BF2胞外區(qū)和輕鏈成熟肽基因重建了四類雞eBF2-1inker-β2m基因鏈。隨后構(gòu)建可溶性表達(dá)載體p2

2、X，分別進(jìn)行可溶性表達(dá)和純化上述十個基因鏈；對純化的BF2胞外區(qū)蛋白質(zhì)分子和一類β2m成熟肽用圓二色譜(CD)儀進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)測定。 結(jié)果表明五類BF2胞外區(qū)基因全長810bp，編碼約270個氨基酸；該類雞β2m成熟肽基因全長297bp，編碼約98個氨基酸；重構(gòu)的MHCⅠ類分子胞外區(qū)基因鏈全長1149bp，編碼約383個氨基酸。BF2s蛋白胞外區(qū)的二級結(jié)構(gòu)均呈典型α螺旋結(jié)構(gòu)，5類BF2s胞外區(qū)蛋白質(zhì)中α-螺旋、β-片層、轉(zhuǎn)角和隨機(jī)

3、卷曲的氨基酸數(shù)分別是69-73，67-72，35-37，和94-98。該類β2m成熟肽中α螺旋、β折疊、轉(zhuǎn)角和隨機(jī)卷曲分別為0、46、32和20個氨基酸。雞復(fù)等位基因BF2s和β2m蛋白質(zhì)分子的同源模建顯示它們的結(jié)構(gòu)和人及鼠的MHCⅠ類分子相似，也有其特殊結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：在α螺旋、β片層、轉(zhuǎn)角、隨機(jī)卷曲的具體位置和數(shù)目方面存在差異。eBF2*04sh-linker-β2m、eBF2*09sh-linker-β2m、eBF2*12sh-link

4、er-β2m與禽流感病毒的多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV結(jié)合，不與豬口蹄疫病毒和草魚呼腸孤病毒的多肽結(jié)合。eBF2*05wj-linker-β2m不與所有的病毒表位結(jié)合。不同類MHCⅠ類分子結(jié)合病毒抗原多肽表位的能力存在差異，不同T細(xì)胞表位也是MHCⅠ類分子限制性的。小鼠免疫試驗(yàn)中，與佐劑對照組相比，九肽KILTIYSTV引起CD8+T淋巴細(xì)胞4.2％的增殖，九肽LLLAIVSLV引起CD8+T淋巴細(xì)胞4.0％的增殖；KIL