補(bǔ)陽還五湯對局灶性腦缺血大鼠外源性神經(jīng)干細(xì)胞存活、分化的影響.pdf

1、目的：探討異體神經(jīng)干細(xì)胞移植對腦缺血的治療作用及其自身成活與分化情況，并從炎癥反應(yīng)探討補(bǔ)陽還五湯對移植細(xì)胞成活、分化的影響。 方法： 1．采用機(jī)械分離方法從新生wastar大鼠腦內(nèi)獲得海馬神經(jīng)干細(xì)胞，并用Brdu標(biāo)記，觀察其標(biāo)記情況。 2．采用MCAO法復(fù)制大鼠局灶性腦缺血模型，隨機(jī)分組，分別通過不同途徑移植Brdu標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞，觀察移植細(xì)胞成活、分化及動物死亡情況。 3．復(fù)制大鼠局灶性腦缺血模型，隨機(jī)

2、分為模型組、空白移植組、單純移植組和中藥聯(lián)合干細(xì)胞移植組，分別給予不同處理，于移植后7、14、21天進(jìn)行神經(jīng)功能評價(jià)，細(xì)胞存活和分化情況觀察。 4．采用RT-PCR和ELIsA方法于移植后1、7、14檢測模型組、單純移植組，中藥聯(lián)合干細(xì)胞移植組腦組織ICAM-1、TNF-α基因和蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1．經(jīng)尾靜脈、側(cè)腦室、海馬移植神經(jīng)干細(xì)胞均可移行入大腦，經(jīng)側(cè)腦室細(xì)胞成活最多，經(jīng)尾靜脈細(xì)胞成活最少，而經(jīng)海馬移

3、植成活細(xì)胞介于兩者之間，但死亡動物最多。 2．海馬神經(jīng)干細(xì)胞短時(shí)間暴露于Brdu可較好地標(biāo)記，并可整合于子代細(xì)胞。 3．經(jīng)側(cè)腦室移植神經(jīng)干細(xì)胞可提高缺血大鼠神經(jīng)功能、細(xì)胞的成活并分化，在第7、14、21天Brdu陽性細(xì)胞分別為(20.3±12)、(25.4±0.8)、(26.7±1.0)個(gè)/mm<'2>，Brdu<'+>/NF<,200><'+>陽性細(xì)胞分別為(5.3±0.8)、(7.3±0.6)、(8.2±0.9)個(gè)/

4、mm<'2>，動物給予補(bǔ)陽還五湯后，第7、14、21天Brdu陽性細(xì)胞分別為(20.4±0.8)、(28.8±1.3)、(30.1±1.6)個(gè)/mm<'2>，Brdu<'+>/NF<,200><'+>陽性細(xì)胞分別為(5.8±0.6)、(9.1±1.0)、(10.9±0.8)個(gè)/mm<'2>，兩組在14、21天差異有顯著性，P<0.05或0.01。聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯可促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，兩組在14、21天差異有顯著性，且神經(jīng)功能積分與新生神經(jīng)元

5、之間有直線相關(guān)性。在模型組、空白移植組未見Brdu、Brdu/NF200陽性細(xì)胞。 4.在正常腦組織有低水平的ICAM-1、TNF-α基因和蛋白表達(dá)，缺血后增強(qiáng)，但隨時(shí)間延長逐漸下降。干細(xì)胞移植后可引起急性炎癥反應(yīng)，ICAM-1基因和蛋白表達(dá)水平上調(diào)，TNF-α基因和蛋白水平表達(dá)上調(diào)。在1、14、21d ICAM-1基因和蛋白水平分別為(1.42±0.08)、(1.14±0.10)、(0.98±0.05)和(73.91±7.3)

6、、(56.93±7.0)、(41.25±6.3)ng/mg，TNF-α基因和蛋白水平分別為(1.13±0.12)、(0.98±0.08)、(0.82±0.11)和(43.7±4.58)、(28.16±5.11)、(19.73±4.11)μg/mg。聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯治療后ICAM-1基因和蛋白水平分別為(1.13±0.12)、(0.92±0.08)、(0.83±0.07)和(72.09±6.8)、(50.88±6.9)、(36.73±5.6

7、)ng/mg，TNF-α基因和蛋白水平分別為(1.04±0.10)、(0.77±0.12)、(0.62±0.08)和(44.30±5.08)、(25.38±4.78)、(15.33±3.98)μg/mg，兩組在7，14d差異有顯著性，P<0.05或P0.01。 結(jié)論： 1.經(jīng)側(cè)腦室移植是有效的移植途徑。 2.神經(jīng)干細(xì)胞移植能在缺血腦內(nèi)存活分化為神經(jīng)元，并促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯能促進(jìn)移植細(xì)胞成活與分化。