同型半胱氨酸致多巴胺能神經(jīng)元模型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑介導(dǎo)Hcy致多巴胺能神經(jīng)元凋亡。 目的: 研究同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)能否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）的途徑誘導(dǎo)體外多巴胺能神經(jīng)元模型凋亡。 方法: 不同終濃度的同型半胱氨酸（0、0.1、0.5，1.0、5.0和10 mmol/L）作用于經(jīng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nerve growth factor，

2、NGF）誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞24h，并選5mmol/L終濃度的同型半胱氨酸在不同時(shí)間點(diǎn)（0h、6h、12h、24h和48h）作用于PC12細(xì)胞，用四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT）檢測(cè)細(xì)胞活性；流式細(xì)胞儀（Flow Cytometer）檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；半定量RT-PCR分析Caspase-12mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：PC12細(xì)胞經(jīng)過Hcy處理后發(fā)生凋亡。在0～24h期間，24h凋亡率呈濃度依賴性增高。經(jīng)5mmol/L同型半胱氨酸處理的

3、PC12細(xì)胞，活力呈時(shí)間依賴性下降。隨PC12細(xì)胞凋亡率增高及活力的下降，Caspase-12表達(dá)同步增加。 結(jié)論：同型半胱氨酸可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡信號(hào)途徑誘導(dǎo)體外多巴胺能神經(jīng)元凋亡。 第二部分、同型半胱氨酸誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究 目的:研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡通路IRE-1/TRAF-2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在Hcy誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡中的作用。 方法: 不同終濃度的同型半胱氨酸（0、0.1、0.5，1.

4、0、5.0和10 mmol/L）作用于經(jīng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞24h，選5mmol/L終濃度的同型半胱氨酸在不同時(shí)間點(diǎn)（0h、6h、12h、24h和48h）作用于PC12細(xì)胞，半定量RT-PCR方法觀測(cè)IRE-1和TRAF-2表達(dá)的變化，并分析其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 結(jié)果：PC12細(xì)胞經(jīng)過Hcy處理后發(fā)生凋亡，隨細(xì)胞凋亡率的增高IRE-1和TRAF-2的表達(dá)亦相應(yīng)增加。 結(jié)論：同型半胱氨酸誘導(dǎo)體外多巴胺能神經(jīng)元凋亡