傘花木和白頭翁中的醌還原酶誘導劑的快速發(fā)現(xiàn).pdf

1、傘花木(Eurycorymbus cavaleriei(Levl，) Rehd. et Hand.-Mazz.)收載于《中國植物志》，系無患子科傘花木屬植物，為中國特有的單種屬植物，屬國家二級保護植物。傘花木的研究集中在生物遺傳、組織培養(yǎng)、品種保護等方面，其化學成分及生物活性未見報道。白頭翁(Pulsatilla chinensis(Bunge) Regel)是一種有著悠久藥用歷史的中藥，用于治療痢疾、瘧疾、陰道滴蟲和細菌感染等，化學及

2、藥理研究表明三萜皂苷是其重要的生物活性成分。
　　 細胞二相代謝酶在化學致癌劑和其它有害氧化劑的代謝中具有重要作用。因而對醌還原酶具有誘導活性的成分被認為在腫瘤起始階段具有潛在的癌癥預防作用。二相酶水平的上調(diào)被認為是預防癌癥發(fā)生的主要機制。
　　 本文對兩種植物的化學成分進行了研究，基于HPLC/ESI_MSn分析手段，采用與還原型谷胱甘肽的結(jié)合方法快速發(fā)現(xiàn)兩種植物提取物中具有醌還原酶( QR)誘導作用的化學成分，并用細

3、胞篩選方法進行了驗證；同時運用銀離子復合法對兩種植物的三萜類成分的質(zhì)譜裂解規(guī)律進行了研究。主要研究內(nèi)容及成果如下：
　　 1.采用柱色譜對傘花木細枝的95％乙醇提取物的石油醚及二氯甲烷萃取部位進行了分離純化。運用IR、UV、ESI-MS、HRESI-MS、1H NMR、13C NMR、HSQC、HMBC、1H-1H COSY、NOESY等波譜手段和理化性質(zhì)鑒定了其中27個化合物的結(jié)構(gòu)。這些化合物均為首次從該植物中分離得到，其中三

4、萜類成分11個，全部為新發(fā)現(xiàn)的三萜，分別鑒定為3p，6p，7p，11α-tetrahydroxy-21aH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T1)，11α-acetyloxy-7β-benzoyloxy-3β，6β-dihydroxy-21aH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T2)，11α-acetyloxy-7β-caproyloxy-3β，6β-dihydroxy

5、-21α，H-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T3)，7β-benzoyloxy-3β，6β，11α-trihydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T4)，6β-acetyloxy-3β，12β-dihydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T5)，7β-benzoyloxy-3β，6β，11β-tri

6、hydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T6)，6β-acetyloxy-7β-benzoyloxy-3β，11β-dihydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T7)，6β-acetyloxy-12β-benzoyloxy-3β-hydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T8)，3β，

7、12β-dihydroxy-21αH-hop-22(29)-ene-24-oic acid methyl ester(EU-T9)，6β-acetyloxy-3β，11β-dihydroxy-21αH-hop-22(29)-ene-24-oic acid methyl ester(EU-T10)，7β-benzoyloxy-3β，24ζ，25-trihydroxy-dammar-20(21)-ene(EU-T11)，并命名為傘花木三萜A

8、-K。另外發(fā)現(xiàn)新聯(lián)苯1個，鑒定為4，4'-dihydroxy-5，5'-bis[(2S，4Z)-6-hydroxy-5-methyl-2-(1-methylethenyl)hex-4-en-1-yl]-3，3'-bis(3-methylbut-2-en-1-yl)-2，2'-biphenyl-1，1'-dicarboxaldehyde(EU-3)，命名為cavalerol。
　　 2.采用柱色譜對白頭翁95％乙醇提取物的石油醚及

9、二氯甲烷萃取部位進行了分離純化。運用IR、UV、ESI-MS、HRESI-MS、1H NMR、13C NMR、HSQC、HMBC、1H-1H COSY、NOESY等波譜手段和理化性質(zhì)鑒定了11個三萜皂苷、1個醌類和1個噻吩類的化學結(jié)構(gòu)。
　　 3.建立了傘花木95％乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位中具有醌還原酶誘導活性的成分的HPLC/ESI_MSn快速發(fā)現(xiàn)方法。首先對從傘花木中分得的9個香豆素對照品進行直接進樣分析，根據(jù)多級質(zhì)譜碎

10、片離子推導其裂解規(guī)律，區(qū)分同分異構(gòu)體。然后以這些規(guī)律為基礎，對傘花木的95％乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位與還原型谷胱甘肽反應前后化學成分的變化進行液質(zhì)聯(lián)用分析，推測出了具有QR誘導作用的2個香豆素類成分。
　　 4.建立了白頭翁95％乙醇提取物的石油醚萃取部位中具有醌還原酶誘導活性的成分的HPLC/ESI-MSn快速發(fā)現(xiàn)方法。對白頭翁的95％乙醇提取物的石油醚萃取部位與還原型谷胱甘肽反應前后化學成分的變化進行液質(zhì)聯(lián)用分析，推測出

11、了具有QR誘導作用的1個醌類化合物和1個噻吩類化合物。
　　 5.利用HPLC-ESI-MSn分析發(fā)現(xiàn)了白頭翁95％乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位中的兩類具相同分子量母核的三萜皂苷的銀離子復合物在正離子模式下不同的質(zhì)譜裂解行為。對銀離子/三萜皂苷復合物進行直接進樣分析，推導出齊墩果烷型三萜皂苷的兩種裂解途徑，并對白頭翁95％乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位進行液質(zhì)聯(lián)用分析，可區(qū)分植物粗提物中的兩類皂苷。
　　 6.利用ESI-