喉癌p53基因突變和STK15基因過表達(dá)與中心體異常相關(guān)性研究.pdf

1、中心體是哺乳類細(xì)胞主要的微管組織中心.它通過在細(xì)胞分裂時建立雙極紡錘體、在有絲分裂期執(zhí)行精確的染色體分離而保持基因組穩(wěn)定.中心體復(fù)制周期的異常會導(dǎo)致單極或多極紡錘體的形成,后者一直被認(rèn)為是染色體不穩(wěn)定和腫瘤發(fā)生的原因.許多類型的腫瘤有這樣一個特點,即大部分細(xì)胞有中心體異常,后者也被證明出現(xiàn)于腫瘤發(fā)生的早期階段且隨腫瘤進(jìn)展.腫瘤中心體擴增與許多遺傳改變相關(guān),包括p53基因突變和STK15基因過表達(dá).在幾乎所有人類腫瘤中都檢測到了p53基因

2、突變.在多數(shù)腫瘤中最常見的點突變發(fā)生于外顯子5~8,在人喉鱗狀細(xì)胞癌(LSCC)中亦如此.然而,對LSCC內(nèi)含子突變研究卻很少.內(nèi)含子突變可以通過引起剪接異?；蜿P(guān)鍵性DNA-蛋白反應(yīng)中斷而影響基因調(diào)控.內(nèi)含子的嘧啶富集區(qū)[thepolypyrimidine(py)tract]和支點一致序列(the branch point consensus sequence)中的任何突變都將通過干擾剪接體組裝效率和mRNA前體(premRNA)的剪接

3、直接影響剪接過程.p53蛋白功能受損將導(dǎo)致中心體異常,此過程可能通過p53蛋白的轉(zhuǎn)激活-非依賴性(transactivation-independent)方式介導(dǎo)STK15蛋白過表達(dá)完成.STK15(也稱BTAK,Aurora-A)是人類絲氨酸/蘇氨酸激酶15/胸部腫瘤擴增激酶,它對染色體分離和中心體功能都至關(guān)重要.在多種腫瘤中STK15基因都出現(xiàn)擴增,其轉(zhuǎn)錄本也有高表達(dá).STK15過表達(dá)誘導(dǎo)中心體數(shù)目增多,異倍體形成和細(xì)胞轉(zhuǎn)化.為探討

4、p53基因內(nèi)含子突變及其對p53蛋白表達(dá)的影響,以及p53基因突變和STK15基因異常表達(dá)相關(guān)性與喉癌中心體異常的關(guān)系,該研究應(yīng)用PCR-SSCP銀染結(jié)合DNA測序和Western Blot,檢測了55例喉鱗癌患者的新鮮或冰凍腫瘤組織及配對正常組織的p53基因外顯子7、8(p53E7和p53E8)、內(nèi)含子7、8(p53I7和p53I8)的突變,及p53蛋白表達(dá)情況;同時對相同的55例配對標(biāo)本用半定量RT-PCR方法檢測STK15基因的表