CYP1A1和p53基因多態(tài)性與男性不育的相關(guān)性研究.pdf

1、全世界育齡夫婦中約有10-15％的人被不孕不育所困擾。在所有的不孕不育中，由男方因素造成的約占50％，其中一個重要的原因是男方生精障礙，主要表現(xiàn)為無精或嚴(yán)重少精，約占不育男性的10％。許多環(huán)境、行為和遺傳因素都會影響男性生殖。近年來研究發(fā)現(xiàn)，精子生成的過程受到諸多基因的調(diào)控。這些基因的缺失、突變或表達(dá)異常都可能導(dǎo)致精子生成障礙，形成少精子癥或無精子癥，導(dǎo)致男性不育。人類基因組計劃的進(jìn)展為闡明男性不育的基因機(jī)制及精確了解基因?qū)ΣG丸功能的影

2、響提供了機(jī)會。 基因多態(tài)性尤其是單核苷酸多態(tài)性(single Nucleotide Polymorphisms，SNPs)是人類最常見的遺傳變異。最近，越來越多的研究表明，男性不育特別是精子生成障礙與某些基因多態(tài)性具有相關(guān)性。由此看來，一些精子發(fā)生相關(guān)基因的SNPs與男性不育可能存在關(guān)聯(lián)性。 本課題采用病例-對照研究設(shè)計，并應(yīng)用限制性片段長度多態(tài)性分析法(Polymorphism chain reaction - Res

3、triction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)，研究CYP1A1和p53基因的多個多態(tài)性單獨或聯(lián)合作用與男性不育的相關(guān)性。 第一部分 CYP1A1基因多態(tài)性與男性不育的相關(guān)性研究 許多化學(xué)物質(zhì)會導(dǎo)致男性生育能力下降，已證實多環(huán)芳烴(Polycyclic aromatic hydrocarbons，PAHs)具有生殖毒性。細(xì)胞色素P4501A1(CYP1A1)可催化多環(huán)芳烴等

4、化合物進(jìn)入體內(nèi)的Ⅰ相反應(yīng)，使其與DNA形成加合物。本研究結(jié)合聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的應(yīng)用來探討CYP1A1基因多態(tài)性與男性不育的相關(guān)性。采用病例-對照研究方法，選擇已經(jīng)確診的192例特發(fā)性無精和嚴(yán)重少精的男性不育患者和143例精子密度正常的不育患者為病例，226名有正常生育史的男性為對照。通過PCR-RFLP方法檢測CYP1A1*2A和CYP1A1*2AC兩位點的基因型。計算不同基因型人群中男性不育患病的相對危險度(OR)及其95％可信區(qū)間(

5、95％CI)。研究發(fā)現(xiàn)，CYP1A1*2C位點三種基因型頻率在無精和嚴(yán)重少精不育病例組中分別為59.4％(AA)、31.8％(AG)和8.8％(GG)，對照組中分別為46.9％(AA)、45.1％(AG)和8.0％(GG)，存在顯著性差異(P=0.019)。在無精和嚴(yán)重少精不育病例與正常對照比較的研究中，Logistic回歸分析顯示：(1)與CYP1A1*2CAA基因型比較，AG基因型攜帶者患男性不育的風(fēng)險顯著降低(OR=0.56，95

6、％CI=0.36-0.86，P=0.005)；當(dāng)合并CYP1A1*2C AG和GG基因型時，AG和GG基因型攜帶者患男性不育的風(fēng)險同樣顯著降低(OR=0.60，95％CI=0.40-0.91，P=0.011)；CYP1A1*2A各基因型在病例組和對照組中的分布無顯著性差異。(2)與C-A單倍型比較，T-G單倍型(OR=0.38，95％CI=0.16-0.87)，C-G單倍型(OR=0.44，95％CI=0.27-0.73)和T-A單倍型

7、(OR=0.51，95％CI=0.32-0.79、)均降低了個體患男性不育的風(fēng)險。研究還發(fā)現(xiàn)，在精子密度正常的男性不育病例中，CYP1A1*2C AG基因型攜帶者精子密度、精子總數(shù)和精子活率均顯著高于CYP1A1*2C AA基因型攜帶者(P=0.049，P=0.016和P=0.049)。我們得出初步結(jié)論，CYP1A1多態(tài)性可能與中國漢族人群的男性不育具有一定的相關(guān)性，但須進(jìn)一步進(jìn)行功能研究并在不同人群中進(jìn)行驗證。 第二部分 p5

8、3基因多態(tài)性與男性不育的關(guān)聯(lián)性研究 盡管一些遺傳因素已被證實會與男性不育具有相關(guān)性，但仍有許多遺傳因素如基因的變異與男性不育的關(guān)系未闡明。p53基因參與了雄性小鼠和大鼠的減數(shù)分裂過程，提示該基因可能在精子生成過程中發(fā)揮重要作用。本課題采用病例-對照研究方法，選擇已經(jīng)確診的198例特發(fā)性無精和嚴(yán)重少精的男性不育患者為病例，233名有正常生育史的男性為對照。通過PCR-PFLP的方法檢測p53 codon72和p53IVS7+72C