BubR1基因在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其SiRNA轉(zhuǎn)染體的構(gòu)建.pdf

1、目的：研究BubR1在乙肝病毒陽性及乙肝病毒陰性HCC細(xì)胞中的表達(dá)差異，明確BubR1與乙肝病毒陰性HCC細(xì)胞相關(guān)性，并篩選出BubR1表達(dá)最高的乙肝病毒陽性肝癌細(xì)胞。篩選最佳轉(zhuǎn)染條件為后續(xù)研究BubR1在體外對(duì)HBV陽性HCC細(xì)胞生物學(xué)行為的影響以及BubR1與HBX相關(guān)性研究提供依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用PCR技術(shù)和Western-blot技術(shù)檢測HBV陰性肝癌細(xì)胞(HepG2、SMMC-7721、MHCC97H)及HBV陽性肝癌

2、細(xì)胞(HepG2.2.15、Hep3B)中BubR1表達(dá)情況，篩選BubR1基因高表達(dá)HBV陽性肝癌細(xì)胞株，構(gòu)建pEGFP-SiBubR1質(zhì)粒，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到高表達(dá)HBV陽性肝癌細(xì)胞篩選沉默效果最佳序列。
　　結(jié)果：通過RT-PCR技術(shù)檢測結(jié)果顯示，BubR1 RNA在HBV陽性肝癌細(xì)胞中表達(dá)高于HBV陰性肝癌細(xì)胞，其中HepG2.2.15中的表達(dá)水平最高;Western-blot技術(shù)檢測結(jié)果顯示，BubR1蛋白在HBV陽性肝癌細(xì)胞中

3、表達(dá)高于HBV陰性肝癌細(xì)胞，其中HepG2.2.15中的表達(dá)水平最高;3個(gè)特異性siRNA-BubR1組轉(zhuǎn)染后，HBV陽性肝癌細(xì)胞中BubR1的mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)明顯降低，其中又以siRNA-BubR1-3轉(zhuǎn)染組抑制效果最明顯。
　　結(jié)論：BubR1在HBV陽性肝癌細(xì)胞中表達(dá)高于HBV陰性肝癌細(xì)胞，其中HepG2.2.15表達(dá)最高。SiRNA轉(zhuǎn)染后能明顯降低HBV陽性肝癌細(xì)胞中BubR1mRNA和蛋白的表達(dá)，siRNA-Bub