黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體在動物體內(nèi)的分布及初步藥效學(xué)研究.pdf

1、目的:本課題在已有的研究基礎(chǔ)上，將黃褐毛忍冬總皂苷制成肝靶向性制劑，通過探討黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體對小鼠急性CCL4肝損傷模型的治療及保護(hù)作用，研究其在小鼠體內(nèi)的分布，提高其臨床治療效果，為黃褐毛忍冬總皂苷的臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:①建立黃褐毛忍冬總皂苷中α-常春藤皂苷的含量測定方法采用HPLC法對黃褐毛忍冬總皂苷中α-常春藤皂苷進(jìn)行含量測定，色譜柱為Welchrom C18(5μm，4.6×250mm);流動相∶乙腈-

2、0.1％磷酸溶液(43∶57);流速1.0ml·min-1;檢測波長為205nm。②黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體的包封率測定及初步穩(wěn)定性研究在已有的研究基礎(chǔ)上，采用乙醇注入法制備脂質(zhì)體，采用微柱離心法和葡聚糖凝膠柱層析法測定其包封率，并對其穩(wěn)定性進(jìn)行研究。③黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體對小鼠急性肝損傷的保護(hù)及治療作用建立小鼠急性CCL4肝損傷模型，通過測血清ALT和AST含量，以及取肝臟做病理組織學(xué)檢查，HE染色，觀察不同劑量黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體

3、對CCL4肝損傷模型的保護(hù)作用;建立小鼠急性CCL4肝損傷模型，通過測血清ALT和AST含量，以及取肝臟做病理組織學(xué)檢查，HE染色，觀察不同劑量黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體對CCL4肝損傷模型的治療作用。④黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體的體內(nèi)分布以不同量的熒光染料脂溶性DiI標(biāo)記乙醇注入法制備的脂質(zhì)體，標(biāo)記黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體;將小鼠體內(nèi)組織的冷凍切片用熒光顯微鏡觀察，考察熒光染料脂溶性DiI標(biāo)記黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體的量;利用共聚焦激光掃面顯微鏡

4、(confocal laser scarm-ing microscope，CLSM)觀察熒光標(biāo)記的脂質(zhì)體150min、30min和1h、2h、4h、6h在小鼠體內(nèi)組織的熒光強(qiáng)弱及分布。
　　結(jié)果:①α-常春藤皂苷在0.32μg-1.62μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)，平均加樣回收率為98.07％，RSD為1.11％(n_6)均符合要求。②采用微柱離心法測得的黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體的包封率最好為50.88％。

5、考察室溫放置96h內(nèi)黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體中總皂苷包封率無明顯下降。3個月內(nèi)黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體沒有出現(xiàn)渾濁、聚集、顏色變化現(xiàn)象。③兩試驗(yàn)中黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體均能顯著降低小鼠血清ALT、AST活性，且向正常水平恢復(fù)，說明黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體對CCL4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷均有較好的保護(hù)及治療作用;從病理組織切片結(jié)果同樣可以初步判斷出，黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體各劑量組均對CCL4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷有較好的治療之保護(hù)作用。④熒光顯微鏡下觀

6、察到用不同量的熒光染料脂溶性DiI標(biāo)記的脂質(zhì)體，DiI的用量為脂質(zhì)體質(zhì)量的5％時(shí)，熒光染料脂溶性DiI染色的黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體的熒光最強(qiáng)。⑤在CLSM下觀察到在15min、6h時(shí)肝、脾、腎、肺組織切片內(nèi)熒光較弱，在30min、1h、2h、4h均觀察到肝組織切片比脾、肺、腎組織切片的熒光強(qiáng)，在1h時(shí)肝組織切片中的熒光最強(qiáng)。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證明，制備的黃褐毛忍冬總皂苷脂質(zhì)體對小鼠急性CCL4肝損傷模型有治療及保護(hù)作用，通過小鼠體