黃褐毛忍冬總皂苷脂質體在動物體內的分布及初步藥效學研究.pdf

1、目的:本課題在已有的研究基礎上，將黃褐毛忍冬總皂苷制成肝靶向性制劑，通過探討黃褐毛忍冬總皂苷脂質體對小鼠急性CCL4肝損傷模型的治療及保護作用，研究其在小鼠體內的分布，提高其臨床治療效果，為黃褐毛忍冬總皂苷的臨床應用奠定實驗基礎。
　　方法:①建立黃褐毛忍冬總皂苷中α-常春藤皂苷的含量測定方法采用HPLC法對黃褐毛忍冬總皂苷中α-常春藤皂苷進行含量測定，色譜柱為Welchrom C18(5μm，4.6×250mm);流動相∶乙腈-

2、0.1％磷酸溶液(43∶57);流速1.0ml·min-1;檢測波長為205nm。②黃褐毛忍冬總皂苷脂質體的包封率測定及初步穩(wěn)定性研究在已有的研究基礎上，采用乙醇注入法制備脂質體，采用微柱離心法和葡聚糖凝膠柱層析法測定其包封率，并對其穩(wěn)定性進行研究。③黃褐毛忍冬總皂苷脂質體對小鼠急性肝損傷的保護及治療作用建立小鼠急性CCL4肝損傷模型，通過測血清ALT和AST含量，以及取肝臟做病理組織學檢查，HE染色，觀察不同劑量黃褐毛忍冬總皂苷脂質體

3、對CCL4肝損傷模型的保護作用;建立小鼠急性CCL4肝損傷模型，通過測血清ALT和AST含量，以及取肝臟做病理組織學檢查，HE染色，觀察不同劑量黃褐毛忍冬總皂苷脂質體對CCL4肝損傷模型的治療作用。④黃褐毛忍冬總皂苷脂質體的體內分布以不同量的熒光染料脂溶性DiI標記乙醇注入法制備的脂質體，標記黃褐毛忍冬總皂苷脂質體;將小鼠體內組織的冷凍切片用熒光顯微鏡觀察，考察熒光染料脂溶性DiI標記黃褐毛忍冬總皂苷脂質體的量;利用共聚焦激光掃面顯微鏡

4、(confocal laser scarm-ing microscope，CLSM)觀察熒光標記的脂質體150min、30min和1h、2h、4h、6h在小鼠體內組織的熒光強弱及分布。
　　結果:①α-常春藤皂苷在0.32μg-1.62μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r=0.9999)，平均加樣回收率為98.07％，RSD為1.11％(n_6)均符合要求。②采用微柱離心法測得的黃褐毛忍冬總皂苷脂質體的包封率最好為50.88％。

5、考察室溫放置96h內黃褐毛忍冬總皂苷脂質體中總皂苷包封率無明顯下降。3個月內黃褐毛忍冬總皂苷脂質體沒有出現(xiàn)渾濁、聚集、顏色變化現(xiàn)象。③兩試驗中黃褐毛忍冬總皂苷脂質體均能顯著降低小鼠血清ALT、AST活性，且向正常水平恢復，說明黃褐毛忍冬總皂苷脂質體對CCL4誘導小鼠急性肝損傷均有較好的保護及治療作用;從病理組織切片結果同樣可以初步判斷出，黃褐毛忍冬總皂苷脂質體各劑量組均對CCL4誘導小鼠急性肝損傷有較好的治療之保護作用。④熒光顯微鏡下觀

6、察到用不同量的熒光染料脂溶性DiI標記的脂質體，DiI的用量為脂質體質量的5％時，熒光染料脂溶性DiI染色的黃褐毛忍冬總皂苷脂質體的熒光最強。⑤在CLSM下觀察到在15min、6h時肝、脾、腎、肺組織切片內熒光較弱，在30min、1h、2h、4h均觀察到肝組織切片比脾、肺、腎組織切片的熒光強，在1h時肝組織切片中的熒光最強。
　　結論:本實驗證明，制備的黃褐毛忍冬總皂苷脂質體對小鼠急性CCL4肝損傷模型有治療及保護作用，通過小鼠體