2-甲氧基雌二醇脂質(zhì)體抗腫瘤藥效學(xué)研究.pdf

1、2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradio，2-ME)是一種甾體激素類化合物，屬新型激素類抗腫瘤藥物，為17β-雌二醇的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物。自20世紀(jì)90年代以來(lái)，大量體內(nèi)外研究表明，2-ME具有抗增殖、抗細(xì)胞凋亡、抗血管生成等多重作用，證實(shí)了它在腫瘤治療中的價(jià)值。體內(nèi)試驗(yàn)中，對(duì)于惡性肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、前列腺癌、宮頸癌、黑色素瘤、肺癌、胰腺癌、惡性內(nèi)皮細(xì)胞瘤及造血系統(tǒng)腫瘤白血病等顯示出抗腫瘤生長(zhǎng)和抗血管新生的作用。臨床前

2、動(dòng)物腫瘤模型實(shí)驗(yàn)顯示2-ME在治療劑量下具有毒性低、耐受性好的優(yōu)點(diǎn)。雖然2-ME的抗腫瘤作用機(jī)制并未完全闡明，但是臨床實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型研究證明，其抗腫瘤作用并不依賴于雌性激素受體，而與破壞微管和抑制HIF，VEGF等細(xì)胞因子的表達(dá)有關(guān)。和其他甾體激素一樣，2-ME在水中的溶解度小，血藥濃度低。本研究考察了2-ME脂質(zhì)體(2-methoxyestradiolliposome，2-ME-L)對(duì)于S180腹水瘤、H22肝癌實(shí)體瘤和食管癌細(xì)胞EC

3、9706移植瘤的抗腫瘤作用，并初步探討了其抗腫瘤機(jī)理。本文的主要研究?jī)?nèi)容摘要如下：
　　 1.2-ME-L對(duì)S180腹水瘤藥效學(xué)研究?？疾炝?-ME-L抑制腹水形成，控制腹水惡化和抑制腹水引起腹腔轉(zhuǎn)移癌的作用，并通過(guò)細(xì)胞周期和凋亡率的檢測(cè)初步探討2-ME影響腹水細(xì)胞周期變化和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。首先成功建立了S180腹水瘤模型，將荷瘤鼠隨機(jī)分為6組，每組20只，雌雄各半，空白脂質(zhì)體0.2ml·d-1為陰性對(duì)照組，5-氟尿嘧啶(5

4、-fluorouracil，5-FU)20mg·kg-1·d-1為陽(yáng)性對(duì)照組，2-ME溶液組(2-ME Solution，2-ME-S)：22.5mg·kg-1·d-1；2-ME-L，高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)劑量組。分組24h后連續(xù)腹腔給藥7d，每2d測(cè)量腹圍，觀察荷瘤鼠行為體征，7d后每組隨機(jī)抽取半數(shù)荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，解剖觀察腹腔中主要臟器，稱重，取出肝臟用中性甲醛固定，常規(guī)切片進(jìn)行病理檢查，收集

5、腹水，測(cè)量體積，計(jì)算細(xì)胞存活率，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)2-ME-L對(duì)于癌細(xì)胞周期和凋亡的影響。剩余小鼠統(tǒng)計(jì)生存時(shí)間，計(jì)算生命延長(zhǎng)率。研究結(jié)果顯示2-ME-L各濃度組小鼠能夠明顯延長(zhǎng)S180荷瘤小鼠的生存時(shí)間，治療組腹水量降低，腹水中癌細(xì)胞數(shù)存活率下降，細(xì)胞凋亡率升高，病理切片結(jié)果顯示癌細(xì)胞較少在腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移，抑瘤作用顯示出明顯的劑量依賴性，2-ME-L將S180腹水瘤細(xì)胞阻滯在G2/M期，從而導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡，2-ME的抗腫瘤作用可能與2-ME對(duì)細(xì)

6、胞周期影響有關(guān)。將同等劑量的2-ME-L與2-ME-S的抗腫瘤作用進(jìn)行對(duì)比可得，2-ME-L的抑瘤作用更顯著，在治療中并未出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，而生命延長(zhǎng)率，肝臟指數(shù)等結(jié)果顯示，2-ME-S對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有較大毒副作用。
　　 2.2-ME-L對(duì)H22肝細(xì)胞癌實(shí)體瘤的抑制作用研究?？疾炝?-ME對(duì)于腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用和對(duì)腫瘤組織內(nèi)部血管生成抑制作用。皮下注射腫瘤細(xì)胞建立H22肝癌實(shí)體瘤模型，將荷瘤鼠分為6組，每組10只，雌雄各半

7、，分別為：H22實(shí)體瘤模型組：生理鹽水0.2ml·d-1；陰性對(duì)照組：空白脂質(zhì)體0.2ml·d-1；陽(yáng)性對(duì)照組：5-氟尿嘧啶(5-FU)20mg·kg-1·d-1；2-ME脂質(zhì)體高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)劑量組。分組24h后尾靜脈注射給藥，連續(xù)7d。給藥期間每2d測(cè)量腹圍，觀察荷瘤鼠行為體征，給藥結(jié)束后24h將小鼠全部處死，先測(cè)量腫瘤體積，然后完整剝離腫瘤組織，立即稱重。最后分別計(jì)算各組腫瘤體積抑制率(VI

8、R)和腫瘤重量抑制率(WIR)。瘤組織經(jīng)4％中性甲醛固定后，常規(guī)脫水、石蠟包埋，4μm切片，蘇木素-伊紅染色，普通光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理變化。免疫組化染色檢測(cè)腫瘤內(nèi)部VEGF、Ki-67和CD34的表達(dá)。研究結(jié)果表明2-ME-L能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并能夠抑制腫瘤組織內(nèi)部新生血管的生成，并顯示出明顯的劑量依賴性，2-ME-L可抑制腫瘤組織內(nèi)細(xì)胞增殖因子的表達(dá)，其抗腫瘤作用可能與癌細(xì)胞的增殖阻滯作用有關(guān)；2-ME-L可

9、減少腫瘤細(xì)胞內(nèi)部微血管密度，降低血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，其抗腫瘤作用可能與體內(nèi)的抑制血管新生作用相關(guān)。陰性對(duì)照組和模型組各項(xiàng)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)結(jié)果沒(méi)有顯著性差異，推測(cè)空白脂質(zhì)體沒(méi)有治療作用。
　　 3.2-ME-L對(duì)食管癌細(xì)胞EC9706裸鼠移植瘤的抑制作用，并初步探討其抗食管癌移植瘤的作用機(jī)制。將食管癌細(xì)胞EC9706的單細(xì)胞懸液注射入BALB/c裸小鼠的右背側(cè)腋部皮下，注射約兩周后皮下實(shí)體瘤形成，將荷瘤鼠隨機(jī)分為5組，每組3只，分別為

10、空白脂質(zhì)體0.2ml·d-1；陽(yáng)性對(duì)照組：5-氟尿嘧啶(5-FU)20mg·kg-1·d-1；2-ME脂質(zhì)體高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)劑量組。分組24h后尾靜脈注射給藥治療，連續(xù)7d。給藥期間每2d測(cè)量腹圍，觀察荷瘤鼠行為體征，給藥結(jié)束后24h將小鼠全部處死，先測(cè)量腫瘤體積，然后完整剝離腫瘤組織，立即稱重。最后分別計(jì)算各組腫瘤體積抑制率(VIR)和腫瘤重量抑制率(WIR)。瘤組織經(jīng)4％中性甲醛固定后，常規(guī)脫

11、水、石蠟包埋，4μm切片，伊紅-蘇木素染色，普通光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理變化。免疫組化染色的方法檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)部VEGF，EGF，Ki-67和HIF-1a的表達(dá)情況，使用TUNEL法檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)部細(xì)胞凋亡的情況，并對(duì)結(jié)果做出統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示，2-ME-L可顯著抑制實(shí)體瘤的生長(zhǎng)，并導(dǎo)致腫瘤內(nèi)部組織出現(xiàn)不同程度的壞死區(qū)，抑瘤作用具有明顯的劑量依賴性；通過(guò)免疫組化檢測(cè)結(jié)果可推測(cè)2-ME-L能夠抑制腫瘤組織內(nèi)皮細(xì)胞的增生，抑制癌細(xì)胞的增殖，