2-甲氧基雌二醇固體脂質(zhì)納米粒水凝膠的研究.pdf

1、2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME)具有多種抗癌活性。Ⅰ期臨床試驗(yàn)表明,2-ME經(jīng)口服給藥存在血藥濃度低、肝首過(guò)效應(yīng)強(qiáng)、生物利用度低、排泄速率快、用藥個(gè)體間的藥理作用差異大等特點(diǎn)。為克服2-ME的在實(shí)際臨床應(yīng)用中存在的缺點(diǎn),本文以2-ME為模型藥物,擬設(shè)計(jì)一種載藥納米粒-水凝膠兩相藥物載體轉(zhuǎn)運(yùn)體系。本研究主要內(nèi)容包括：
　　 ⑴在單岡素考察的基礎(chǔ)上,采用正交試驗(yàn)法優(yōu)化處方。激光納米粒度測(cè)定儀測(cè)定其平

2、均粒徑大小為150±17 nm,zeta電位為-35±4.8mv,超濾離心法測(cè)定的包封率和載藥量分別為88.10％±2.23%和1.65%±0.05%。以6%海藻糖和4%甘露醇為凍干保護(hù)劑冷凍干燥得2-ME SLN凍干粉,掃描電鏡(SEM)顯示納米粒呈類球形,差示掃描量量熱(DSC)分析結(jié)果顯示,藥物以無(wú)定形態(tài)分布于納米粒中。采用動(dòng)態(tài)透析袋擴(kuò)散法測(cè)定納米粒體外釋藥,體外釋放曲線方程擬合結(jié)果顯示,藥物釋放以Higuchi模型釋放最好。

3、r>　　 ⑵以6-香豆素?zé)晒鈽?biāo)記SLN進(jìn)行PC-3細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取具有時(shí)間依賴性。細(xì)胞定量攝取實(shí)驗(yàn)顯示,相對(duì)于2-ME溶液,細(xì)胞對(duì)2-ME SLN具有較高的攝取率。以人前列腺癌PC-3細(xì)胞株、人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株、神經(jīng)母細(xì)胞痛SK-N-SH細(xì)胞株、鼠源性乳腺癌4T1細(xì)胞株為模型細(xì)胞,采用SRB法考察了2-ME SLN對(duì)各細(xì)胞株的細(xì)胞毒性,結(jié)果顯示,與2-ME溶液相比,2-ME SLN分散液對(duì)PC-3細(xì)胞株的

4、細(xì)胞毒作用增強(qiáng)17倍,對(duì)4T1細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用增強(qiáng)11.59倍,對(duì)SK-N-SH細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用增強(qiáng)6.8倍,對(duì)MCF-7細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用增強(qiáng)2.56倍。證明SLN作為藥物載體可以增強(qiáng)癌細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性。
　　 ⑶將2-ME SLN凍干粉分散于嵌段聚合物水溶液中混勻制備2-ME SLN聚合物混懸液。本文對(duì)2-ME SLN聚合物混懸液的體外特征如相變溫度、低溫粘度、穩(wěn)定性和釋放進(jìn)行了考察。相變溫度測(cè)定結(jié)果表明,其在20～5

5、5℃溫度范圍內(nèi)具有可逆的溫敏特性。粘度測(cè)定結(jié)果顯示其在低溫(20℃)下,粘度值低于1Pa·s,流動(dòng)性良好。以SEM、粒徑的測(cè)定、游離藥物含量的測(cè)定和熒光標(biāo)記技術(shù)等手段進(jìn)行的穩(wěn)定性考察結(jié)果顯示,2-ME SLN在水凝膠中穩(wěn)定存在,且能從水凝膠中持續(xù)釋放出來(lái)。不同影響因素的體外釋放結(jié)果顯示,基于PLGA-PEG-PLGA聚合物的水凝膠可以作為2-ME SLN的儲(chǔ)庫(kù),能緩釋納米粒至少1～2個(gè)月,2-MESLN水凝膠的釋放速度主要受其含量的影響

6、,體外釋放曲線方程擬合結(jié)果顯示,其釋放以一級(jí)模式較好。
　　 ⑷將制備的2-ME SLN聚合物混懸液小鼠局部皮下注射,對(duì)其在體內(nèi)的生物組織相容性、體內(nèi)釋放規(guī)律、紐織分布、腫瘤靶向轉(zhuǎn)運(yùn)以及對(duì)小鼠移植瘸模型的治療效果等進(jìn)行了評(píng)價(jià),結(jié)果表明,該2-ME SLN水凝膠生物相容性良好,小鼠皮下可至少持續(xù)釋放46天,且各組織藥物濃度很低,體內(nèi)外釋藥曲線分段擬合結(jié)果顯示在體內(nèi)外釋放規(guī)律上相關(guān)性良好。6-香豆素?zé)晒鈽?biāo)記的SLN瘤內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)冰凍切片和

7、痛塊勻漿液熒光照片顯示,6-香豆素SLN小鼠皮下痛旁注射后,納米粒轉(zhuǎn)運(yùn)到了痛組織內(nèi),并且進(jìn)入了瘤細(xì)胞內(nèi)。以Balb/C小鼠4T1細(xì)胞移植瘤模型進(jìn)行抗腫瘤實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,2-ME SLN水凝膠比2-ME水凝膠具有更好的抗腫瘤效果,抑瘤率分別為90%和58%。
　　 ⑸體外和體內(nèi)的系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)研究表明,本文設(shè)計(jì)的2-ME SLN水凝膠兩相藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體系是成功的,其避免了納米粒系統(tǒng)給藥后被單核巨噬細(xì)胞吞噬快速清除和全身分布藥物濃度低等缺點(diǎn),